[發(fā)明專利]一種DNP-BSA聚合度的質(zhì)控方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011297476.8
• 申請日: 2020-11-18
• 公開（公告）號(hào): CN112526123B
• 公開（公告）日: 2022-05-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張濤;巢姍;周國棟;盛布恩
• 申請（專利權(quán)）人: 廈門同仁心生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/558
• 分類號(hào): G01N33/558;G01N33/543;G01N33/577
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本申請涉及免疫層析檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體公開了一種DNP?BSA聚合度的質(zhì)控方法。包括以下步驟：S1、噴金墊的制備：將待測BSA?DNP采用膠體金標(biāo)記后包被在噴金墊上；S2、包被膜的制備：通過點(diǎn)噴方式將檢測抗體間隔包被在包被膜上形成檢測線，在包被膜上按樣品層析方向間隔設(shè)置有至少兩條檢測線；S3、檢測試紙條的制備：將包被膜和樣品墊、噴金墊、吸收墊黏接在一起并固定在基片區(qū)上；S4、在樣品墊上滴加60?120μl緩沖液，靜置600s以上，觀察結(jié)果。本申請的制備方法具有將聚合度符合使用條件的DNP?BSA批次挑選出來的優(yōu)點(diǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本申請涉及免疫層析檢測技術(shù)領(lǐng)域，更具體地說，它涉及一種DNP-BSA聚合度的質(zhì)控方法。

背景技術(shù)

免疫層析技術(shù)是基于抗原抗體特異性免疫反應(yīng)的膜檢測技術(shù)。該技術(shù)以固定有檢測線(包被抗體或包被抗原)的條狀硝酸纖維層析材料為固定相，測試液為流動(dòng)相，熒光或者膠體金標(biāo)記的抗體或抗原固定于玻璃纖維材質(zhì)的結(jié)合墊，通過毛細(xì)管作用使待分析物在層析條上移動(dòng)。待測物在流動(dòng)相作用下先與熒光標(biāo)記抗體或者抗原結(jié)合，當(dāng)?shù)竭_(dá)檢測線時(shí)再與包被抗體或者抗原結(jié)合形成熒光條帶或者金標(biāo)條帶，從而達(dá)到檢測待測物的目的。

現(xiàn)有的免疫層析檢測試紙條在生產(chǎn)、儲(chǔ)存和運(yùn)輸過程中的失誤會(huì)導(dǎo)致檢測結(jié)果存在假陰性的情況。為了排除假陰性導(dǎo)致的檢測失誤，一般會(huì)在硝酸纖維素膜上添加一條質(zhì)控線。常用的質(zhì)控線系統(tǒng)有羊抗鼠多克隆抗體系統(tǒng)，雞IgY和羊抗雞IgY系統(tǒng)。DNP-BSA是最近興起的一種質(zhì)控線系統(tǒng)，由于2，4-二硝基苯酚是動(dòng)植物體內(nèi)天然不存在的小分子化合物，該技術(shù)使用抗2，4-二硝基苯酚(DNP)的抗體和偶聯(lián)到牛血清白蛋白的2，4-二硝基苯酚(BSA-DNP)制作質(zhì)控線，使得此系統(tǒng)有優(yōu)良的穩(wěn)定性并且極少對檢測線產(chǎn)生干擾。

化學(xué)偶聯(lián)方法合成的DNP-BSA是多個(gè)BSA和DNP交聯(lián)形成的多聚物，制備過程中反應(yīng)條件的變化會(huì)導(dǎo)致DNP-BSA的聚合度發(fā)生變化。高聚合度的BSA能夠提高質(zhì)控線的信號(hào)強(qiáng)度，但是過高的聚合度會(huì)產(chǎn)生信號(hào)堆積現(xiàn)象(質(zhì)控線度的信號(hào)不均一，質(zhì)控線樣品墊一側(cè)的信號(hào)會(huì)大大高于另一側(cè)吸水墊的一側(cè))，導(dǎo)致熒光檢測的精密度(CV)變大；過低的聚合度容易導(dǎo)致質(zhì)控線信號(hào)強(qiáng)度較低的問題。

目前DNP-BSA的生產(chǎn)工藝無法很好的控制DNP-BSA的聚合度，不同批次的DNP-BSA的聚合度總是在一定的范圍內(nèi)變動(dòng)，其中只有一部分能夠滿足層析紙條的使用條件?，F(xiàn)有技術(shù)中體積排阻色譜法(SES)(也稱凝膠滲透色譜法(GPC))是測量聚合物分子量的常用方法，但是BSA-DNP的分子量過大超出了該方法的測量范圍，無法用來測量BSA-DNP的聚合度，導(dǎo)致無法將符合使用條件的DNP-BSA批次挑選出來。

發(fā)明內(nèi)容

為了將聚合度符合使用條件的DNP-BSA批次挑選出來，本申請?zhí)峁┮环NDNP-BSA聚合度的質(zhì)控方法。

本申請?zhí)峁┑囊环NDNP-BSA聚合度的質(zhì)控方法，采用如下的技術(shù)方案：

一種DNP-BSA聚合度的質(zhì)控方法，包括以下步驟：

S1、噴金墊的制備：將待測BSA-DNP采用膠體金標(biāo)記后包被在噴金墊上；

S2、包被膜的制備：通過點(diǎn)噴方式將檢測抗體間隔包被在包被膜上形成檢測線，在包被膜上按樣品層析方向間隔設(shè)置有至少兩條檢測線；

S3、檢測試紙條的制備：將包被膜和樣品墊、噴金墊、吸收墊黏接在一起并固定在基片區(qū)上；

S4、在樣品墊上滴加60-120μl緩沖液，靜置600s以上，觀察結(jié)果。