[發(fā)明專利]篩選靶細(xì)胞的方法、試劑盒及其用途

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011297134.6
• 申請(qǐng)日: 2020-11-18
• 公開（公告）號(hào): CN112326964A
• 公開（公告）日: 2021-02-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 高曉航;魏雨
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京利康立德生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/569
• 分類號(hào): G01N33/569;C07K16/00
• 代理公司: 北京景聞知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11742
• 代理人: 張強(qiáng)

本發(fā)明提供了一種篩選靶細(xì)胞的方法，所述靶細(xì)胞適于分泌目標(biāo)分子，其包括：在適于分泌目標(biāo)分子的條件下，在培養(yǎng)腔室中，對(duì)所述候選單細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，其中，所述培養(yǎng)腔室中設(shè)置有信號(hào)篩選層，所述信號(hào)篩選層覆蓋所述單細(xì)胞，所述信號(hào)篩選層含有特異性識(shí)別所述目標(biāo)分子的信號(hào)分子；和基于所述信號(hào)篩選層中所述信號(hào)分子的信號(hào)，選擇適于分泌所述目標(biāo)分子的靶細(xì)胞。利用該方法能夠有效篩選分泌目標(biāo)分子的靶細(xì)胞。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體的，本發(fā)明涉及篩選靶細(xì)胞的方法、試劑盒及其用途，更具體的，本發(fā)明涉及一種篩選靶細(xì)胞的方法，一種試劑盒，一種制備抗體的方法，一種篩選單克隆抗體的方法，一種單克隆抗體，一種抗體-抗原復(fù)合物，一種篩選抗體的方法。

背景技術(shù)

有限稀釋法是一種常用的克隆方法，是指將需要再克隆的細(xì)胞株自培養(yǎng)孔內(nèi)吸出并作細(xì)胞計(jì)數(shù)，計(jì)出1mL的細(xì)胞數(shù)。常用來篩選融合的動(dòng)物細(xì)胞。單克隆抗體是由單一B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的高度均一、僅針對(duì)某一特定抗原表位的抗體。通常采用雜交瘤技術(shù)來制備，雜交瘤(hybridoma)抗體技術(shù)是在細(xì)胞融合技術(shù)的基礎(chǔ)上，將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細(xì)胞和具有無限繁殖能力的骨髓瘤細(xì)胞融合為B細(xì)胞雜交瘤。

然而，目前篩選表達(dá)目標(biāo)分子的細(xì)胞的方法，尤其是篩選能夠單克隆抗體的融合細(xì)胞的方法仍有待改進(jìn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在至少解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問題之一。為此，本發(fā)明提供了一種能夠有效表達(dá)。

在本發(fā)明的一個(gè)方面，本發(fā)明提出了一種篩選靶細(xì)胞的方法，所述靶細(xì)胞適于分泌目標(biāo)分子，其特征在于，包括：在適于分泌目標(biāo)分子的條件下，在培養(yǎng)腔室中，對(duì)所述候選單細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，其中，所述培養(yǎng)腔室中設(shè)置有信號(hào)篩選層，所述信號(hào)篩選層覆蓋所述單細(xì)胞，所述信號(hào)篩選層含有特異性識(shí)別所述目標(biāo)分子的信號(hào)分子；和基于所述信號(hào)篩選層中所述信號(hào)分子的信號(hào)，選擇適于分泌所述目標(biāo)分子的靶細(xì)胞。利用該方法，由于在培養(yǎng)腔室中，僅存在單細(xì)胞，因此，在培養(yǎng)過程中，如果該單細(xì)胞能夠分泌目標(biāo)分子，則目標(biāo)分子可以被信號(hào)分子特異性捕獲，由此，可以使得信號(hào)分子在特定范圍內(nèi)發(fā)生聚集，從而信號(hào)分子的信號(hào)可以被放大，由此，通過檢測(cè)信號(hào)分子的信號(hào)差異，可以確定該單細(xì)胞能否表達(dá)目標(biāo)分子。該方法與現(xiàn)有的有限稀釋法相比要快速、節(jié)省成本、提高效率，并且能夠?qū)崿F(xiàn)高通量篩選。

在本發(fā)明的第二方面，本發(fā)明提了一種試劑盒，根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，其包括：水凝膠；信號(hào)分子；和生物培養(yǎng)芯片。利用該試劑盒，可以有效地實(shí)施前面所述的方法，從而實(shí)現(xiàn)前面所描述的效果，另外前面針對(duì)方法所描述的特征同樣適用該試劑盒，在此不再贅述。

本發(fā)明還提出了一種制備抗體的方法，根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，其包括：利用前面所述的方法，篩選目標(biāo)細(xì)胞；使所述目標(biāo)細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增和表達(dá)抗體。由此，可以有效地獲得能夠表達(dá)單克隆抗體的融合細(xì)胞。

本發(fā)明還提出了一種篩選單克隆抗體的方法，根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，其包括：將多個(gè)雜交瘤細(xì)胞分配在所述生物培養(yǎng)芯片上，其中，每個(gè)所述腔室中每個(gè)所述培養(yǎng)腔室中含有至多一個(gè)所述雜交瘤細(xì)胞；根據(jù)前面所述的方法，選擇陽性雜交瘤細(xì)胞；分離所述陽性雜交瘤細(xì)胞；對(duì)所述陽性雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)和抗體表達(dá)，以便獲得單克隆抗體。如前所述，利用本發(fā)明的方法，能夠有效地獲得表達(dá)單克隆抗體的融合細(xì)胞，從而進(jìn)一步可以獲得單克隆抗體。

本發(fā)明還提出了一種一種單克隆抗體，其是通過前面所述的方法獲得的。

本發(fā)明還提出了一種抗體-抗原復(fù)合物，所述抗體為前面所述的單克隆抗體，所述單克隆抗體上連接有信號(hào)分子。利用該抗體-抗原復(fù)合物能夠有效地獲得配對(duì)抗體，即和已知單克隆抗體具有不同抗原決定簇的抗體。