[發明專利]兔抗人ApoA1多抗血清的制備方法

在審

• 申請號: 202011296870.X
• 申請日: 2020-11-18
• 公開（公告）號: CN112375144A
• 公開（公告）日: 2021-02-19
• 發明（設計）人: 高健;陳旭華;汪淵;諶敦華
• 申請（專利權）人: 上海鈸樂詩生物技術有限公司
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C07K16/06
• 代理公司: 上海精晟知識產權代理有限公司 31253
• 代理人: 楊軍

本發明公開了一種利用兔生產抗人ApoA1多抗血清的方法，選用體格強健、免疫力好的10月齡雄性日本大耳兔為免疫動物，行肩前皮下+腹股溝皮下+頸背部皮下低劑量多點免疫，依據免疫期動物血清抗體滴度優化免疫劑量及免疫間隔，旨在激活多部位淋巴細胞提升免疫效價及獲得穩定抗體水平，保障抗體原料性能穩定。

技術領域

本發明涉及生物診斷抗體原料領域，具體涉及一種抗人ApoA1的兔多抗血清的制備方法。

背景技術

載脂蛋白是血漿中參與血漿脂質(膽固醇、甘油三酯及磷脂)轉運的重要載脂蛋白，目前發現的載脂蛋白主要包括APOAI、APOAII、ApoⅣ、ApoB100、Apoa、ApoE、ApoH、ApoCⅡ、ApoCⅢ、ApoB48，其中ApoJAⅠ含量較高且占高密度脂蛋白(High density Lipprotein，HDL)蛋白總量的70％以上，ApoJAⅠ是HDL主要的載脂蛋白，HDL是抗動脈粥樣硬化的血漿脂蛋白，因此行血漿ApoAⅠ水平檢測對動脈粥樣硬化患者病情評估起到重要參考價值。

關于ApoAⅠ水平的檢測目前主要采用生化比濁的方法，此檢測方法需要相應的ApoAⅠ生化試劑，其中ApoAⅠ標準品和抗人ApoAⅠ抗體是試劑的主要組成部分。生化比濁法對試劑檢測結果的可重復性、批間差(CV％)、檢測靈敏度、線性范圍以及試劑的穩定性均有嚴格要求，而這些指標很大程度上決定于抗體原料。

目前，抗人ApoAⅠ抗體的制備動物主要包括羊、兔及小鼠等，其中羊源性抗人ApoA1抗體應用最多，因羊體型大，采集血漿量多，非常適合臨床生產需要，但是羊源性抗人ApoA1抗體具有穩定性差及親和力低問題，而兔與人的ApoA1蛋白氨基酸序列同源性高于羊，因此免疫獲得的抗體的親和力高于羊源性抗人ApoA1抗體；小鼠主要參與單克隆抗體制備，由于生產周期長且影響因素較多，因此在ApoA1抗體制備中應用較少。與免疫動物羊相比，兔的血清脂肪含量較低更適應于ApoAⅠ的免疫，可有效避免血漿抗體收集中血脂的干擾，且獲得的抗體靈敏度相比較高，其中日本大耳兔因抗應激能力強，因此可有效保障動物機體對抗原的免疫效應，從而提升免疫效價。

傳統的免疫方法主要采用單點大劑量注射，這種方法受乳化操作以及動物個體淋巴系統功能性差異影響，容易降低抗原的捕獲幾率以及局部組織吸收擴散能力，最終降低免疫效果或造成免疫耐受。

發明內容

本發明旨在提升生化試劑原料抗人ApoAⅠ抗體的產品性能，滿足生產需要，而發明一種利用優勢動物多部位低劑量多點免疫獲取高效價、高親和力抗體的方法。

為實現上述目的，實施兔抗人ApoA1多抗血清的制備方案。

本發明的一個實施方案提供了一種制備兔抗人ApoA1多抗血清的方法，包括以下步驟：

(1)免疫動物的選擇：選用體格強健、抗應激能力好、血脂水平偏低[即，兔的甘油三酯水平(47±5)mg/dl；Wu Yin，Ester Carballo Jane,David G McLaren,et al.Plasmalipid profiling across species for the identification of optimal animalmodels of human dyslipidemia[J].Journal of Lipid Research,2012,53(1):51-65]的10月齡雄性日本大耳兔為免疫動物；

(2)免疫動物的抗應激改善：免疫前3d給予氨基電解多維飲水，維持機體電解質、氨基酸及維生素供應，提升抗應激能力；