[發(fā)明專利]一種鴨病毒性肝炎卵黃抗體及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011296303.4
• 申請(qǐng)日: 2020-11-18
• 公開（公告）號(hào): CN112552398B
• 公開（公告）日: 2021-08-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉國(guó)英;陳生雷;吳冠辰;李慧;姜斌;楊淑芳;佟暉;楊闊;舒秀偉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 遼寧益康生物股份有限公司
• 主分類號(hào): C07K16/10
• 分類號(hào): C07K16/10;C07K16/02;A61K39/42;A61P1/16;A61P31/14
• 代理公司: 北京五洲洋和知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11387
• 代理人: 榮紅穎;張洪生

本發(fā)明公開了一種用于治療、預(yù)防、減緩或控制鴨病毒性肝炎的卵黃抗體的制備方法，包括如下步驟：將微生物保藏號(hào)為CGMCC No.19696的Ⅰ型鴨病毒性肝炎病毒疫苗株和/或微生物保藏號(hào)為CGMCC No.19695的Ⅲ型鴨病毒性肝炎病毒疫苗株作為免疫原，制備成鴨病毒性肝炎疫苗；用鴨病毒性肝炎疫苗接種禽體，獲得高免禽蛋；從高免禽蛋中提取卵黃抗體。本發(fā)明還公開了通過前述方法制備得到的卵黃抗體。該卵黃抗體特異性好，安全有效。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物制品領(lǐng)域，涉及一種鴨病毒性肝炎卵黃抗體及其制備方法，特別涉及一種Ⅰ型鴨病毒性肝炎和Ⅲ型鴨病毒性肝炎二價(jià)卵黃抗體及制備方法。

背景技術(shù)

我國(guó)鴨存欄量每年約40億只。鴨病毒性肝炎(Duck viral hepatitis，DVH) 是由鴨甲型肝炎病毒(Duck hepatitis A virus，DHAV)引起的雛鴨的急性、致死性傳染病，以發(fā)病急、肝腫大、出血和高度致死率為特征。主要感染21 日齡以內(nèi)的雛鴨，引起典型的肝炎癥狀，雛鴨死亡率高達(dá)80％以上，傳播迅速，呈廣泛性分布。

2008年，DHV被重新命名為鴨甲型肝炎病毒(Duck hepatitis A virus， DHAV)。DHAV分為A、B、C三個(gè)基因型，分別對(duì)應(yīng)DHAV-1、DHAV-2、 DHAV-3，具OIE報(bào)道亞洲主要流行鴨肝炎Ⅰ型及其變異株，即鴨甲肝病毒，該病主要危害3周齡以內(nèi)雛鴨，發(fā)病急，死亡率高，尤其是1～2周齡的雛鴨發(fā)病率和死亡率較高，死亡率可達(dá)30％以上，是危害養(yǎng)鴨業(yè)重要傳染病之一。

卵黃抗體是指從免疫禽蛋中提取出的針對(duì)特定抗原的抗體，由于卵黃中僅有IgG類抗體，故稱其為卵黃免疫球蛋白IgG(egg yolk immunoglobulins)，簡(jiǎn)稱為IgY。卵黃抗體的形成過程是：當(dāng)機(jī)體受到外界特異性抗原(尤其是滅活抗原)的刺激后誘發(fā)一系列的免疫應(yīng)答反應(yīng)，激發(fā)B細(xì)胞分化成能分泌特異性抗體的漿細(xì)胞，分泌大量的特異性抗體進(jìn)入血液中。同時(shí)在產(chǎn)蛋禽體內(nèi)，血液中的特異性抗體IgG(所有亞群)由卵巢IgG受體的介導(dǎo)逐步進(jìn)入到卵巢濾泡和輸卵管中，并在卵黃中蓄積起來，也正是由于這種卵黃累積作用，使卵黃中的IgG明顯地高于血清中的含量，而血清中的其他抗體(主要是IgM，IgA)與輸卵管中的卵白白蛋白一起混入到雞蛋白中。

雞卵黃抗體IgY是雞的一種免疫球蛋白Ig，雞IgY在功能上相當(dāng)于哺乳動(dòng)物IgG，但結(jié)構(gòu)上有所不同，具有典型的的免疫球蛋白的空間構(gòu)象。雞卵黃抗體具有很多優(yōu)越性。

卵黃抗體的研究始于19世紀(jì)末，1893年，Klemperer發(fā)現(xiàn)了卵黃中富含抗體；1934年Jukes的實(shí)驗(yàn)證明母雞血清中的抗體可以轉(zhuǎn)移到卵黃中，從而為雛雞提供被動(dòng)免疫保護(hù)。Patters等的試驗(yàn)證實(shí)，相對(duì)別的血漿蛋白，IgG 被選擇性的轉(zhuǎn)運(yùn)到卵泡中。1969年，Leslie和Clem將這種抗體命名為IgY。

禽類卵黃中的抗體主要是卵黃免疫球蛋白，與血清抗體相比，卵黃抗體具有許多獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)：(1)無需采血，只需收集免疫種鴨產(chǎn)下的蛋即可純化得到卵黃抗體；(2)有良好的穩(wěn)定性，且耐熱耐酸，常溫下仍能保持一定的活性。 (3)治療效果明顯，特異性強(qiáng)，且易大規(guī)模生產(chǎn)。(4)安全、無殘留、溫和環(huán)保。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明公開了一種鴨病毒性肝炎病毒卵黃抗體的制備方法，所用的疫苗株為用DF-1細(xì)胞系培養(yǎng)的Ⅰ型LSE株和Ⅲ型QZE 株，該卵黃抗體安全性好，效價(jià)高。

本發(fā)明第一方面提供了一種用于治療、預(yù)防、減緩或控制鴨病毒性肝炎的卵黃抗體的制備方法，所述制備方法為：以鴨病毒性肝炎病毒疫苗株為免疫原免疫禽體，制備所述卵黃抗體；

所述鴨病毒性肝炎病毒疫苗株為Ⅰ型鴨病毒性肝炎病毒疫苗株和/或Ⅲ型鴨病毒性肝炎病毒疫苗株；

所述Ⅰ型鴨病毒性肝炎病毒疫苗株是微生物保藏號(hào)為CGMCC No.19696 的病毒株，或其臨床致病性與免疫原性沒有變化的傳代病毒株或突變病毒株；