[發(fā)明專利]一種羊棲菜中抑藻活性化合物的制備方法及用途

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011296163.0
• 申請(qǐng)日: 2020-11-18
• 公開（公告）號(hào): CN112480200A
• 公開（公告）日: 2021-03-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫斯麒;徐年軍;孫雪;胡珊珊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 寧波大學(xué)
• 主分類號(hào): C07J9/00
• 分類號(hào): C07J9/00;A01N45/00;A01P13/00
• 代理公司: 蘇州和氏璧知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 32390
• 代理人: 李曉星

本發(fā)明公開了一種羊棲菜中抑藻活性化合物的制備方法及用途，其制備方法為羊棲菜干粉經(jīng)85%乙醇浸提濃縮，經(jīng)石油醚萃取分離得粗提物；粗提物經(jīng)硅膠柱層析、凝膠柱層析及制備薄層色譜等方法對(duì)其分離純化；經(jīng)NMR及TOF?MS共鑒定出3種對(duì)赤潮異彎藻具有良好抑制效果的化合物。本發(fā)明從羊棲菜中提取天然抑藻活性成分，獲得一種利用羊棲菜的天然活性組分，屬于天然成分，在水體中易于降解，不會(huì)對(duì)自然界造成二次污染，為其資源化利用提出了新的途徑；同時(shí)本發(fā)明所述抑藻方法具有提取工藝簡(jiǎn)單，操作方法簡(jiǎn)便等諸多優(yōu)點(diǎn)，該方法具有良好的抑藻效果，可以有效的去除赤潮異彎藻，為赤潮異彎藻的去除提供了新的方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及赤潮藻治理領(lǐng)域，尤其是涉及一種羊棲菜中抑藻活性化合物的制備方法及用途。

背景技術(shù)

羊棲菜（Sargassum fusiforme）是一種生長(zhǎng)在溫帶的多年生大型經(jīng)濟(jì)海藻，浙江洞頭縣是我國(guó)羊棲菜的主產(chǎn)區(qū)，羊棲菜養(yǎng)殖具有凈化環(huán)境的作用，羊棲菜養(yǎng)殖區(qū)附近很少有赤潮的發(fā)生。羊棲菜不僅是一種美味的食品，還富含多糖、蛋白質(zhì)及微量元素等對(duì)人體有益的成分，是一種典型的藥用和食用同源藻類（浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014(04)：487-491）。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)羊棲菜生物活性物質(zhì)的研究，主要集中在對(duì)羊棲菜多糖降血糖、抗腫瘤、抗氧化和抗病毒等活性的研究。前期的工作中，我們發(fā)現(xiàn)了羊棲菜有較好的抑藻效果，但目前國(guó)內(nèi)外尚未見羊棲菜抑藻物質(zhì)分離純化和鑒定的專利和文獻(xiàn)報(bào)道, 現(xiàn)有的物理和化學(xué)方法治理赤潮存在成本高、二次污染和持續(xù)性不強(qiáng)等問題相對(duì)于這兩種方法，生物法更加專一、高效，具有生物安全性。近年來，圍繞大型海藻與赤潮的相互作用，科學(xué)家們做了大量的研究。研究表明，大型海藻可以直接或間接的抑制微藻的生長(zhǎng)。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)上述情況，為克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，本發(fā)明提供一種羊棲菜中抑藻活性化合物的制備方法及用途，本發(fā)明從羊棲菜中提取天然抑藻活性成分，獲得一種利用羊棲菜的天然活性組分，屬于天然成分，在水體中易于降解，不會(huì)對(duì)自然界造成二次污染，為其資源化利用提出了新的途徑；同時(shí)本發(fā)明所述抑藻方法具有提取工藝簡(jiǎn)單，操作方法簡(jiǎn)便等諸多優(yōu)點(diǎn)，該方法具有良好的抑藻效果，可以有效的去除赤潮異彎藻，為赤潮異彎藻的去除提供了新的方法。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：本發(fā)明提供了一種羊棲菜中抑藻活性化合物的制備方法，所述制備方法按如下的步驟進(jìn)行：

S1:新鮮羊棲菜經(jīng)清洗后，陰處自然風(fēng)干，人工或機(jī)械粉碎過40目篩；稱取羊棲菜粉末，按料液比1:10（M/V）加入85%乙醇，25℃浸提24h，用布氏漏斗進(jìn)行抽濾得到濾液；重復(fù)提取3次后合并濾液，濾液經(jīng)減壓蒸發(fā)至無醇味；檢測(cè)該濃縮液對(duì)赤潮異彎藻生長(zhǎng)強(qiáng)抑制效果；

S2:濃縮液依次使用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇進(jìn)行萃取，每次萃取重復(fù)3次，萃取液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得到組分A、組分B、組分C與組分D；組分A經(jīng)抑藻活性檢測(cè)具有抑制赤潮異彎藻的活性；

S3：組分A采用硅膠柱層析進(jìn)行分離，得到11個(gè)再分組分，分別進(jìn)行抑藻活性檢測(cè)；經(jīng)抑藻活性檢測(cè)，其中4個(gè)再分組分A3、A4、A5和A6具有顯著抑制赤潮異彎藻生長(zhǎng)的活性；除A3組分繼續(xù)進(jìn)行硅膠柱和SephadexLH-20凝膠柱層析分離外，其余組分采用硅膠薄層層析進(jìn)行制備；A3組分經(jīng)凝膠柱層析分離后得到6個(gè)組分；其中A3-2、A3-3與A3-4具有抑制赤潮異彎藻生長(zhǎng)的活性，且有較高的純度；A3-2、A3-3和A4-4經(jīng)NMR與TOF-MS鑒定，分別為巖藻甾醇、24-氫過氧基-24-乙烯基膽甾醇和馬尾藻甾醇，均為甾醇類化合物。

根據(jù)上述技術(shù)方案，所述步驟S3中，組分A采用200-300目硅膠柱層析進(jìn)行分離，洗脫液均為體積比為石油醚：丙酮（30:1，25:1，20:1，10:1，5:1，1:1，0:1），梯度洗脫，流速為1.0mL/min，洗脫至所有物質(zhì)流出；所有組分經(jīng)減壓濃縮，點(diǎn)樣于硅膠GF-254薄層色譜板上進(jìn)行層析，以體積比為1:5-1:1氯仿/石油醚為展開劑；硫酸乙醇溶液顯色后，合并相同餾分后，得到組份A1-A11。