[發(fā)明專(zhuān)利]一種羊棲菜中抑藻活性化合物的制備方法及用途

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011296163.0
• 申請(qǐng)日: 2020-11-18
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112480200A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-03-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫斯麒;徐年軍;孫雪;胡珊珊
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 寧波大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C07J9/00
• 分類(lèi)號(hào): C07J9/00;A01N45/00;A01P13/00
• 代理公司: 蘇州和氏璧知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 32390
• 代理人: 李曉星

1.一種羊棲菜中抑藻活性化合物的制備方法，其特征在于，所述制備方法按如下的步驟進(jìn)行：

S1:新鮮羊棲菜經(jīng)清洗后，陰處自然風(fēng)干，人工或機(jī)械粉碎過(guò)40目篩；稱(chēng)取羊棲菜粉末，按料液比1:10（M/V）加入85%乙醇，25℃浸提24h，用布氏漏斗進(jìn)行抽濾得到濾液；重復(fù)提取3次后合并濾液，濾液經(jīng)減壓蒸發(fā)至無(wú)醇味；檢測(cè)該濃縮液對(duì)赤潮異彎藻生長(zhǎng)強(qiáng)抑制效果；

S2:濃縮液依次使用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇進(jìn)行萃取，每次萃取重復(fù)3次，萃取液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得到組分A、組分B、組分C與組分D；組分A經(jīng)抑藻活性檢測(cè)具有抑制赤潮異彎藻的活性；

S3：組分A采用硅膠柱層析進(jìn)行分離，得到11個(gè)再分組分，分別進(jìn)行抑藻活性檢測(cè)；經(jīng)抑藻活性檢測(cè)，其中4個(gè)再分組分A3、A4、A5和A6具有顯著抑制赤潮異彎藻生長(zhǎng)的活性；除A3組分繼續(xù)進(jìn)行硅膠柱和SephadexLH-20凝膠柱層析分離外，其余組分采用硅膠薄層層析進(jìn)行制備；A3組分經(jīng)凝膠柱層析分離后得到6個(gè)組分；其中A3-2、A3-3與A3-4具有抑制赤潮異彎藻生長(zhǎng)的活性，且有較高的純度；A3-2、A3-3和A4-4經(jīng)NMR與TOF-MS鑒定，分別為巖藻甾醇、24-氫過(guò)氧基-24-乙烯基膽甾醇和馬尾藻甾醇，均為甾醇類(lèi)化合物。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種羊棲菜中抑藻活性化合物的制備方法，其特征在于，所述步驟S3中，組分A采用200-300目硅膠柱層析進(jìn)行分離，洗脫液均為體積比為石油醚：丙酮（30:1，25:1，20:1，10:1，5:1，1:1，0:1），梯度洗脫，流速為1.0mL/min，洗脫至所有物質(zhì)流出；所有組分經(jīng)減壓濃縮，點(diǎn)樣于硅膠GF-254薄層色譜板上進(jìn)行層析，以體積比為1:5-1:1氯仿/石油醚為展開(kāi)劑；硫酸乙醇溶液顯色后，合并相同餾分后，得到組份A1-A11。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種羊棲菜中抑藻活性化合物的制備方法，其特征在于，所述步驟S3中在組分A3使用SephadexLH-20凝膠柱層析進(jìn)行分離，以用石油醚：氯仿：甲醇（7:5:1，V/V）為洗脫劑，流速為1.0mL/min，洗脫至所有物質(zhì)流出；所有餾分減壓濃縮，點(diǎn)樣于硅膠GF254薄層層析，以體積比為1:2氯仿/石油醚為展開(kāi)劑；合并相同餾分后，得到組份A3-2、A3-3和A4-4。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任何一項(xiàng)所述的一種羊棲菜中抑藻活性化合物的用途，其特征在于，所述用途包括分離制得的組份中的一種或幾種在制備抑制了赤潮異彎藻的生長(zhǎng)活性組合物中的應(yīng)用。