[發明專利]一種神經母細胞瘤循環腫瘤細胞的捕獲芯片及其制作方法

有效

• 申請號: 202011294338.4
• 申請日: 2020-11-18
• 公開（公告）號: CN112391263B
• 公開（公告）日: 2022-05-27
• 發明（設計）人: 文飛球;陳小文;袁秀麗;宋建明;劉宗彬
• 申請（專利權）人: 深圳市兒童醫院
• 主分類號: C12M1/00
• 分類號: C12M1/00;B01L3/00;C12N5/09;G01N33/569
• 代理公司: 北京精金石知識產權代理有限公司 11470
• 代理人: 姜艷華

一種神經母細胞瘤循環腫瘤細胞(CTCs)的捕獲芯片及其制作方法，本發明提供的神經母細胞瘤CTC的捕獲芯片，包括玻璃基底層和帶有微柱陣列圖案的聚合物層，玻璃基底層表面修飾有能特異性捕獲神經母細胞瘤CTCs的CD56抗體。本發明的有益效果在于：1、提高了分離通量；2、提高了分離效率和純度；3、CTC原位捕獲；4、分離細胞活性的提高；5、成本的降低：集成操作減少了人工勞動和耗材使用，顯著降低了檢測成本。

技術領域

本發明涉及一種循環腫瘤細胞(CTCs)的捕獲芯片，具體來說涉及一種神經母細胞瘤循環腫瘤細胞(CTCs)的捕獲芯片及其捕獲方法。

背景技術

神經母細胞瘤(Neuroblastoma，NB)是兒童最常見的顱外腫瘤，是嬰幼兒最常見的腫瘤，有將近一半的神經母細胞瘤發生在2歲以內的嬰幼兒。該病是由身體多個部位的未成熟神經細胞發展而來的一種癌癥，通常起源于腹部或胸部的交感神經，最常起源于腎上腺。不同疾病起源及擴散部位的患者會表現出不同癥狀，如腹脹、腹痛、便秘或腹瀉、呼吸困難、皮膚腫塊、骨痛、疲乏等。神經母細胞瘤誤診率很高，易誤診為白血病、生長痛、風濕性關節炎、肺炎及腹瀉病等。當腫瘤細胞類似原始粒細胞或原始淋巴細胞時，常與白血病、惡性淋巴瘤、尤文肉瘤、小細胞未分化癌等混淆。因為神經母細胞瘤的初發癥狀不典型，所以在早期診斷有所困難，但是研究發現，腫瘤發生的早期就有腫瘤細胞或者腫瘤DNA片段釋放到血液中，因此檢測血液中的腫瘤循環細胞(circulation tumor cells，CTCs)和循環腫瘤DNA(circulating tumor DNA，ctDNA)有助于腫瘤的早期診斷。

傳統的神經母細胞瘤檢測方法有：組織病理學檢查(HE染色)、蛋白質組檢測(免疫組化IHC)、生化檢測和影像學檢查等。HE染色操作簡易，成本低，IHC靈敏度較高，但這兩種方法與其他一些惡性腫瘤在鑒別上有重疊，鑒別診斷困難，且不能指導預后判斷。生化檢測主要是檢測血液或尿液里兒茶酚胺及其代謝產物(多巴胺，高香草酸、香草扁桃酸)的濃度，一般神經母細胞瘤患者中其含量較正常人群有顯著升高。影像學檢查是利用間位腆代芐胍掃描。傳統的腫瘤組織活檢存在給患者帶來很大痛苦，不能頻繁操作，且只能對單一器官進行檢測，容易激發癌細胞快速增長等許多局限。

循環腫瘤細胞是近30年來研究應用的僅有的幾個新型腫瘤分子標志物之一。現階段循環腫瘤細胞的捕獲方法主要有免疫磁珠吸附法、密度梯度離心法、膜過濾法和流控芯片法。其中一些捕獲方法存在操作復雜、成本高、捕獲難度大等問題，另外由于腫瘤的異質性，很多腫瘤標志物特異性并不高。

發明內容

為輔助診斷神經母細胞瘤，克服當前CTCs檢測技術操作復雜、特異性低、尚不成熟等問題，本發明提供了一種神經母細胞瘤CTCs的捕獲芯片及其制作方法和捕獲方法；本發明提供的技術方案如下文所述。

本發明的目的之一在于提供一種神經母細胞瘤CTCs的捕獲芯片的制作方法，該制作方法包括有如下的步驟：

1)使用光刻技術，在硅襯底上制造微柱陣列圖案，然后在圖案化的硅基板倒入聚合物，加熱固化后形成聚合物層；

具體的為：使用標準光刻和軟光刻技術，制造出可以捕獲神經母細胞瘤CTCs的微流體裝置：使用光掩模，在硅襯底上制造微柱陣列圖案，然后在圖案化的硅襯底上倒入聚合物，然后在70-90℃，優選80-85℃下固化，優選的固化時間為0.5小時，形成聚合物層；

所述的微柱陣列圖案的排列方式可以和CN110564588相同。

所述聚合物，可以是聚甲基丙烯酸甲酯、聚碳酸酯、聚乙烯、聚苯乙烯、聚乙醇乙烯酯、聚丙烯、聚氯乙烯、聚醚醚酮、聚二甲基硅氧烷(PDMS)等的一種或多種，優選為聚二甲基硅氧烷(PDMS)。

2)將經步驟1)固化后從硅襯底上剝離的聚合物層打孔以形成入口孔和出口孔；