[發(fā)明專利]一種神經(jīng)母細(xì)胞瘤循環(huán)腫瘤細(xì)胞的捕獲芯片及其制作方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011294338.4
• 申請(qǐng)日: 2020-11-18
• 公開（公告）號(hào): CN112391263B
• 公開（公告）日: 2022-05-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 文飛球;陳小文;袁秀麗;宋建明;劉宗彬
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳市兒童醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12M1/00
• 分類號(hào): C12M1/00;B01L3/00;C12N5/09;G01N33/569
• 代理公司: 北京精金石知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11470
• 代理人: 姜艷華

1.一種神經(jīng)母細(xì)胞瘤循環(huán)腫瘤細(xì)胞的捕獲芯片，其特征在于，所述的捕獲芯片包括玻璃基底層和設(shè)于所述的玻璃基底層上方的有多組微柱陣列圖案的聚合物層，所述聚合物為聚甲基丙烯酸甲酯、聚碳酸酯、聚乙烯、聚苯乙烯、聚乙醇乙烯酯、聚丙烯、聚氯乙烯、聚醚醚酮、聚二甲基硅氧烷中的一種或多種，所述的玻璃基底層通過氧等離子鍵合與帶有微柱陣列圖案的聚合物層牢固連接，所述的玻璃基底層表面修飾連接有能特異性捕獲神經(jīng)母細(xì)胞瘤循環(huán)腫瘤細(xì)胞的CD56抗體；所述的微柱為三角形、圓形、長(zhǎng)方形和“工”字形結(jié)構(gòu)中的一種或幾種，多組微柱陣列按臨界分選尺寸分布，微柱呈錯(cuò)位排列，其排列方向與血液流動(dòng)方向的夾角為20-30度；

所述的微柱的邊長(zhǎng)或直徑在10-30微米之間，兩個(gè)相鄰微柱之間的橫向間隔20-30微米，縱向間隔為7-15微米，微柱高度為30微米。

2.如權(quán)利要求1所述的神經(jīng)母細(xì)胞瘤循環(huán)腫瘤細(xì)胞的捕獲芯片，其特征在于，所述的聚合物層為PDMS層。

3.權(quán)利要求1-2任一項(xiàng)所述的神經(jīng)母細(xì)胞瘤循環(huán)腫瘤細(xì)胞的捕獲芯片的制作方法，其特征在于，所述的制作方法包括如下的步驟：

1)使用光刻技術(shù)，在硅襯底上制造微柱陣列圖案，然后在圖案化的硅基板倒入聚合物，加熱固化后形成聚合物層；

所述聚合物為聚甲基丙烯酸甲酯、聚碳酸酯、聚乙烯、聚苯乙烯、聚乙醇乙烯酯、聚丙烯、聚氯乙烯、聚醚醚酮、聚二甲基硅氧烷中的一種或多種；

2)將經(jīng)步驟1)固化后的聚合物層從硅基板剝離，再對(duì)聚合物層打孔以形成入口孔和出口孔；

3)取一玻璃基底，清洗處理后對(duì)玻璃基底和聚合物層的接觸面進(jìn)行氧等離子體表面改性，然后將聚合物層與玻璃基底表面鍵合粘連，形成捕獲芯片的原型；

4)對(duì)步驟3)處理的捕獲芯片的內(nèi)部用3-巰基丙基三甲氧基硅烷乙醇溶液(5％)于室溫下反應(yīng)30分鐘；

5)對(duì)步驟4)處理過的捕獲芯片的內(nèi)部用N-馬來(lái)酰亞胺基丁酰氧基琥珀酰亞胺酯(GMBS)于室溫下反應(yīng)30分鐘；

6)繼續(xù)向芯片內(nèi)部通入抗生物素蛋白的磷酸鹽緩沖溶液于室溫下反應(yīng)1小時(shí)；

7)最后向芯片內(nèi)部通入生物素包被的CD56抗體，室溫反應(yīng)30分鐘；即得到了可以原位捕獲神經(jīng)母細(xì)胞瘤CTC的捕獲芯片。

4.如權(quán)利要求3所述的神經(jīng)母細(xì)胞瘤循環(huán)腫瘤細(xì)胞的捕獲芯片的制作方法，其特征在于，所述的CD56抗體溶液濃度為10μg/mL的磷酸鹽緩沖溶液(PBS)，含有1.0％(w/v)牛血清白蛋白和0.1％的疊氮化鈉。