[發明專利]一種用于可視化檢測活細胞內腫瘤相關mRNA的DNA四棱錐的制備方法

有效

• 申請號: 202011294095.4
• 申請日: 2020-11-18
• 公開（公告）號: CN112280830B
• 公開（公告）日: 2022-04-08
• 發明（設計）人: 陳憲;文俊梅;陳果
• 申請（專利權）人: 福州大學
• 主分類號: C12Q1/6818
• 分類號: C12Q1/6818;C12N15/11
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 饒文君;蔡學俊

1.一種用于可視化檢測活細胞內腫瘤相關mRNA的DNA四棱錐，其特征在于，所述DNA四棱錐包括兩條捕獲探針CP和四條帶有熒光標記的DNA支撐探針S1~S4，所述S1~S4引物序列為：

S1：

5'-TCGCTGAGTAAT/Cy3/AAATCAACGCCTCAACGTTAGCAAAAGCAAGTGTGGGCACGCACACAAAACACAAATCTG-3 '；

S2：

5'-CTATCGGTAGAT/Cy3/AACGCAGTCAGTGTCAGTCCAGAAAATACTCAGCGACAGATTTGTGAAAACAACTAGCGG-3'；

S3：

5'-CACTGGTCAGAT/Cy5/AAATCAACGCCTCAACGTTAGCAAAACTACCGATAGCCGCTAGTTGAAAAGGTTTGCTGA-3'；

S4：

5'-CCACACTTGCAT/Cy5/AACGCAGTCAGTGTCAGTCCAGAAAACTGACCAGTGTCAGCAAACCAAAAGTGTGCGTGC-3'；

所述DNA四棱錐的制備方法包括以下步驟：

將DNA干粉溶于1×TAE/Mg²⁺緩沖液，得到濃度為100 μM的母液備用；相關DNA經兩步退火反應組裝成為DNA四棱錐，具體步驟為：在1×TAE/Mg²⁺緩沖液中，等摩爾的S1，S3分別與兩條捕獲探針CP在金屬浴中 95℃加熱5min，自然冷卻至室溫，然后將其混合并加入等摩爾的S2和S4在PCR儀中50℃加熱10min，按照3min/℃的速度冷卻到25℃，4℃保持60min的程序退火，得到終濃度1μM的DNA四棱錐；

所述兩條捕獲探針CP的序列均為：

CP：5'-TTGGTGAAGCTAACGTTGAGGCGTT-3'；

所述1×TAE/Mg²⁺緩沖液成分包括：終濃度20mM Tris、2mM EDTA、12.5mM MgCl₂，pH7.4。