[發明專利]快速鑒別海馬多鞭丸中五種動物藥材的分子生物學方法

有效

• 申請號: 202011288860.1
• 申請日: 2020-11-17
• 公開（公告）號: CN114507741B
• 公開（公告）日: 2023-10-03
• 發明（設計）人: 耿福能;姜順日;耿越飛;高潔;劉彬
• 申請（專利權）人: 沈陽清宮藥業集團有限公司
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.海馬多鞭丸中五種動物藥材特異性引物：

1）海馬特異性Cytb引物，其特征在于，其序列是：

正向引物1F: 5’-TGCCCTTGTAGACCTSCCT-3’；

反向引物1R: 5’-GCAAATRTGTGTTACTGAAGAGAA-3’

2）鹿茸特異性Cytb引物，其特征在于，其序列是：

正向引物2F: 5’-GCAAACGGGGCATCAAT-3’；

反向引物2R: 5’-AAGCAGGTCTGGTGCGAAT-3’

3）雀腦特異性COI引物，其特征在于，其序列是：

正向引物3F: 5’-GCTACTCACCGACCGCAA-3’；

反向引物3R: 5’-TTATAGTGGCGGATGTGAAGTAG-3’

4）蛤蚧特異性Cytb引物，其特征在于，其序列是：

正向引物4F: 5’-ATCCGAGATGTCCACTA-3’；

反向引物4R: 5’-AAGTATGGGTGAAATGG -3’

5）牛鞭特異性COI引物，其特征在于，其序列是：

正向引物5F: 5’-CGTAGTTGTAACCGCAC-3’；

反向引物5R: 5’-GCTAAGTGTAAAGAGAARATG-3’。

2.用于檢測海馬、鹿茸、雀腦、蛤蚧和牛鞭的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒含有權利要求1所述的引物。

3.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括dNTPs、Taq DNA聚合酶、Mg²⁺、PCR反應緩沖液中的至少一種。

4.根據權利要求2或3所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括標準陽性模板。

5.根據權利要求1所述引物或者權利要求2-4任一項所述試劑盒在檢測海馬、鹿茸、雀腦、蛤蚧和牛鞭中的應用。

6.海馬多鞭丸中海馬(1F1R)、鹿茸(2F2R)、雀腦(3F3R)、蛤蚧(4F4R)和牛鞭(5F5R)的特異性PCR檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

供試品前處理；

提取樣品DNA；

以步驟2）提取的DNA為模板，利用權利要求1所述的引物進行PCR擴增反應；

分析PCR產物。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，步驟3）中，一次PCR反應體系以20ul計為：2×Taq PCR PreMix 10ul、模板DNA（海馬多鞭丸藥品DNA）6.0 ul、正，反向引物（10umol/L）各1.0 ul (1F1R、3F3R、4F4R、5F5R)或各0.8ul（2F2R）、無菌雙蒸水補足至20ul；二次PCR反應體系以20ul計為：2×Taq PCR PreMix 10 ul、模板DNA（一次PCR產物） 2.5~3.5 ul、正，反向引物（10umol/L）各1.0 ul (1F1R、3F3R、4F4R、5F5R)或各0.8ul（2F2R）、無菌雙蒸水補足至20ul。

8.根據權利要求6或7所述的方法，其特征在于，所述PCR擴增反應條件為：94℃預變性5 min；94℃變性 30 s；50℃（海馬、牛鞭、蛤蚧）、55℃（雀腦）、60℃（鹿茸） 20 s；35個循環。