[發明專利]一種加速畢赤酵母發酵液過濾速度的方法

有效

• 申請號: 202011285403.7
• 申請日: 2020-11-17
• 公開（公告）號: CN112301006B
• 公開（公告）日: 2023-08-08
• 發明（設計）人: 詹澤濤;秦雷;周櫻;詹志春;辜玲芳;劉文悅
• 申請（專利權）人: 武漢新華揚生物股份有限公司
• 主分類號: C12N9/00
• 分類號: C12N9/00;B01D36/04;C12R1/84
• 代理公司: 北京匯澤知識產權代理有限公司 11228
• 代理人: 吳靜

本發明屬于生物工程技術領域，具體涉及一種加速畢赤酵母發酵液過濾速度的方法，包括如下步驟：1）取畢赤酵母發酵液，先添加可溶性鈣鹽，攪拌均勻，并調節pH至5.0?5.5，對畢赤酵母進行絮凝；2）再添加磷酸鹽，攪拌均勻，可溶性鈣鹽和磷酸鹽反應生成磷酸鈣，使絮凝體系更容易成團并沉淀；3）然后加入助濾劑，攪拌均勻后直接過濾。本發明利用Ca²⁺對畢赤酵母進行絮凝，并用磷酸鹽使絮凝體系沉淀，該絮凝體系條件溫和，絮凝劑各成分對蛋白質尤其是酶蛋白無影響，適用于畢赤酵母發酵表達飼用酶制劑的絮凝；且本發明提供的方法不僅操作簡單，而且能夠加快畢赤酵母發酵液過濾速度，并提升飼用酶制劑的收率。

技術領域

本發明屬于生物工程技術領域，具體涉及一種加速畢赤酵母發酵液過濾速度的方法。

背景技術

畢赤酵母是一類可以以甲醇為唯一碳源生長的單細胞真核生物，其作為宿主菌被廣泛用來表達各類外源蛋白，例如各類酶制劑等。在畢赤酵母的生產表達過程中，往往運用高密度培養策略表達外源蛋白，發酵完成后的發酵液往往具有酵母菌體濃度高，黏度大的缺點，為后續進一步分離純化帶來了一定的困難。

板框過濾往往是在工業生產中分離純化畢赤酵母表達產物的第一步，板框過濾具有操作條件溫和，能耗小的優點，但由于畢赤酵母發酵液菌體濃度大，黏度高的特點，導致板框過濾效率不高。

絮凝是指使水或液體中懸浮微粒集聚變大，或形成絮團，從而加快粒子的聚沉，達到固-液分離的目的，通常絮凝的實施靠添加適當的絮凝劑，其作用是吸附微粒，在微粒間“架橋”，從而促進集聚。絮凝劑主要分為無機絮凝劑和有機絮凝劑，常用的無機絮凝劑包括鋁類絮凝劑(硫酸鋁、氯化鋁、聚合硫酸鋁、聚合氯化鋁)和鐵類絮凝劑(硫酸鐵、氯化鐵、聚合氯化鐵、聚合硫酸鐵)等，有機絮凝劑包括聚丙烯酰胺類，都對蛋白有一定的毒害作用，尤其影響酶制劑的活性。

飼用酶制劑指用于飼料領域的酶制劑產品，主要有植酸酶、木聚糖酶、甘露聚糖酶、纖維素酶、葡萄糖氧化酶、蛋白酶、脂肪酶等，受動物胃腸道pH影響，飼用酶制劑要求在pH酸性條件下具有一定的穩定性，因此，常用的飼用酶制劑往往具有耐酸不耐堿的特點。

專利CN102838655A提供了一種利用殼聚糖作為絮凝劑，對畢赤酵母發酵液進行絮凝的方法，但該專利控制pH在6～12，實施例控制pH在8～10，不利于畢赤酵母發酵表達飼用酶的絮凝。

發明內容

為了克服上述現有技術存在的不足，本發明的目的是提供一種加速畢赤酵母發酵液過濾速度的方法，能夠加速畢赤酵母發酵液的固液分離，提高利用畢赤酵母生產時的過濾效率，并提升飼用酶制劑收率。

為實現上述目的，本發明的技術方案為一種加速畢赤酵母發酵液過濾速度的方法，包括如下步驟：

1)取畢赤酵母發酵液，先添加可溶性鈣鹽，攪拌均勻，并調節pH，對畢赤酵母進行絮凝；

2)再添加磷酸鹽，攪拌均勻，可溶性鈣鹽和磷酸鹽反應生成磷酸鈣，使絮凝體系沉淀；

3)然后加入助濾劑，攪拌均勻后直接過濾。

進一步地，所述可溶性鈣鹽包括氯化鈣、碳酸氫鈣、硝酸鈣中的一種或幾種，優選為氯化鈣。

進一步地，步驟1)中，可溶性鈣鹽的添加量為畢赤酵母發酵液質量的0.5％-3％，優選為1-2％，更優選為1％。

進一步地，步驟1)中，調節pH范圍為3.0-5.5，優選為5.0-5.5，更優選為5.5。

進一步地，所述磷酸鹽包括磷酸氫二鈉、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鈉、磷酸二氫鉀，磷酸鈉、磷酸鉀中的一種或幾種，優選為磷酸氫二鈉或磷酸氫二鉀。

進一步地，步驟2)中磷酸鹽的添加量為畢赤酵母發酵液質量的1％-6％，優選為2％-4％，更優選為2％。

進一步地，所述助濾劑為珍珠巖或硅藻土。