[發(fā)明專(zhuān)利]測(cè)定人血漿中咪唑斯汀濃度的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011282960.3
• 申請(qǐng)日: 2020-11-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112461961A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-03-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周藝;周旺;尹小麗
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 湖南泰新醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N30/02
• 分類(lèi)號(hào): G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/36;G01N30/72;G01N30/86;G01N30/88
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本發(fā)明屬于醫(yī)藥檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體公開(kāi)了一種測(cè)定人血漿中咪唑斯汀濃度的方法，采用蛋白沉淀法從血漿基質(zhì)中提取咪唑斯汀，采用LC?MS/MS法測(cè)定人血漿中咪唑斯汀濃度，解決了血漿基質(zhì)干擾多的問(wèn)題，靈敏度高，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，基質(zhì)效應(yīng)、高血脂基質(zhì)效應(yīng)和溶血基質(zhì)效應(yīng)均無(wú)干擾，準(zhǔn)確度和精密度高，用量小，可用于臨床大批量樣品分析需求。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)藥檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種測(cè)定人血漿中咪唑斯汀濃度的方法。

背景技術(shù)

咪唑斯汀(Mizolastine)是一種長(zhǎng)效、特異性、高選擇性的性外周組胺H1受體拮抗劑，具抗組胺和抗變態(tài)反應(yīng)活性，其藥理作用除選擇性的競(jìng)爭(zhēng)抑制組胺H1受體及抑制肥大細(xì)胞釋放組胺外，還有抗炎作用。臨床上用于治療季節(jié)性過(guò)敏性鼻炎(花粉癥)、常年性過(guò)敏性鼻炎以及皮膚過(guò)敏性疾病如慢性蕁麻疹，與其他第二代抗組胺H1受體拮抗劑相似，其優(yōu)點(diǎn)為無(wú)抗膽堿作用和無(wú)中樞鎮(zhèn)靜作用。本品口服后吸收迅速，血漿濃度達(dá)峰時(shí)間(T_max)為1.5小時(shí)，生物利用度約為65％，藥代動(dòng)力學(xué)呈線(xiàn)性，平均消除半衰期為13.0小時(shí)，藥物在血漿蛋白結(jié)合率約為98.4％。因此具有起效快，并且作用持久(超過(guò)24小時(shí))的特點(diǎn)。咪唑斯汀的清除主要在肝臟通過(guò)葡萄糖醛酸化進(jìn)行代謝，其他代謝途徑之一是通過(guò)細(xì)胞色素P4503A4酶形成羥基化代謝產(chǎn)物，其代謝產(chǎn)物均無(wú)藥理活性，只有不到0.5％以原形的形式由尿排出。采用14C標(biāo)記的咪唑斯汀進(jìn)行的平衡研究顯示，服用劑量中的84％～95％在糞便中排出。其主要不良反應(yīng)主要有輕至中度的嗜睡、乏力、口干等。

葉林虎等(藥物分析雜志，2016,36(11),2022-2028)建立一種靈敏、快捷的LC-MS/MS方法，快速檢測(cè)皮膚科常用中藥制劑中添加的氯雷他定、鹽酸苯海拉明、鹽酸賽庚啶、鹽酸西替利嗪、鹽酸異丙嗪、咪唑斯汀、馬來(lái)酸氯苯那敏7種抗組胺化學(xué)藥物。經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，可作為皮膚科中藥制劑中檢出添加抗組胺化學(xué)藥物的檢測(cè)方法。現(xiàn)有的咪唑斯汀有關(guān)物質(zhì)方法是采用液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測(cè)中藥制劑中的咪唑斯汀含量，檢測(cè)基質(zhì)為中藥制劑。中藥制劑基質(zhì)組成簡(jiǎn)單，該技術(shù)的前處理方法不能適用血漿基質(zhì)中咪唑斯汀的濃度測(cè)定，具有一定的局限性。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明的目的在于提供一種測(cè)定人血漿中咪唑斯汀濃度的方法，采用LC-MS/MS法測(cè)定人血漿中咪唑斯汀濃度，采用蛋白沉淀法從血漿基質(zhì)中提取咪唑斯汀且解決了血漿基質(zhì)干擾多的問(wèn)題，靈敏度高，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一方面，本發(fā)明提供一種測(cè)定人血漿中咪唑斯汀濃度的方法，包括如下步驟：提取血漿中的咪唑斯汀，得到提取液；將提取液采用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)進(jìn)行定性定量測(cè)定。

進(jìn)一步地，所述高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜的液相色譜條件包括：

色譜柱：Waters XSelect HSS C₁₈，規(guī)格為3.5μm，3×50mm；流動(dòng)相A為0.1％甲酸水溶液；流動(dòng)相B為甲醇；流速：0.6mL/min；采用梯度洗脫；停止時(shí)間：4.0min；洗針液沖洗：15s；進(jìn)樣量：1μL；柱溫：30℃；進(jìn)樣器溫度：4℃。

進(jìn)一步地，所述洗針液為50％甲醇水溶液。

本發(fā)明選擇色譜柱：Waters XSelect HSS C₁₈，規(guī)格為3.5μm，3×50mm；對(duì)血漿中的咪唑斯汀的響應(yīng)值最高，峰形較好，對(duì)稱(chēng)且不拖尾，出峰時(shí)間時(shí)間不會(huì)太靠前，也不會(huì)太靠后，剛好合適。

考慮流速對(duì)藥物出峰時(shí)間的影響以及進(jìn)樣量過(guò)大導(dǎo)致出峰效果的影響，本發(fā)明選擇流速為0.6mL/min，采用進(jìn)樣量為1μL，不僅可保證藥物出峰效果和響應(yīng)值，也能使藥物完全洗脫趕緊，避免對(duì)色譜柱的污染，同時(shí)也利于回收率的提升和后續(xù)質(zhì)譜檢測(cè)的靈敏度的提升。

進(jìn)一步地，所述梯度洗脫的程序?yàn)椋?/p>