[發明專利]一種基于轉谷氨酰胺酶誘導交聯的甲殼素納米纖維/Nisin復合保鮮劑以及制備方法

在審

• 申請號: 202011280558.1
• 申請日: 2020-11-16
• 公開（公告）號: CN112544686A
• 公開（公告）日: 2021-03-26
• 發明（設計）人: 吳春華;姜海鑫;趙建波;孫繼帥;段孟霞;余珊;陳鈺;嚴志明
• 申請（專利權）人: 福建農林大學
• 主分類號: A23B4/10
• 分類號: A23B4/10;A23B4/18;A23B4/22;A23L3/3454;A23L3/3571;D06M15/15;D06M16/00;D01F9/00;D06M101/10
• 代理公司: 北京盛凡智榮知識產權代理有限公司 11616
• 代理人: 林燕

1.一種基于轉谷氨酰胺酶誘導交聯的甲殼素納米纖維/Nisin復合保鮮劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1甲殼素納米纖維的制備：

將甲殼素粉末分散在含有33％(w/v)的氫氧化鈉和0.3％的硼氫化鈉(w/v)，在90℃的水浴中，磁力攪拌4h，得到的甲殼素溶液經抽濾、洗滌，得到的殘渣在45℃烘箱中干燥1h，用1％(v/v)醋酸溶液溶解，超聲處理1h，靜置30min，取出上清液冷凍干燥，得到甲殼素納米纖維；

S2轉谷氨酰胺酶誘導交聯的甲殼素納米纖維/Nisin復合保鮮劑的制備：

將S1所述的甲殼素納米纖維置于1％的冰醋酸溶液(v/v)，利用超聲處理1h，制備濃度為2.4mg/mL的甲殼素納米纖維溶液，將加Nisin與0.4％的轉谷氨酰胺酶(m/m，基于Nisin的干物質量)加入到上述溶液中，以500rpm/min條件下攪拌30min，得到Nisin與甲殼素納米纖維混合溶液，再將混合溶液至于40℃的水浴搖床中振蕩，調節混合溶液最終的pH。

2.根據權利要求1所述的一種基于轉谷氨酰胺酶誘導交聯的甲殼素納米纖維/Nisin復合保鮮劑的制備方法，其特征在于，S1中所述抽濾過程中使用去離子水洗滌濾渣5～7次，直至沖洗的濾液無色即可。

3.根據權利要求1所述的一種基于轉谷氨酰胺酶誘導交聯的甲殼素納米纖維/Nisin復合保鮮劑的制備方法，其特征在于，S1中所述的冷凍干燥過程為先將上清液置于潔凈的玻璃皿中用保鮮膜包裹并在-80℃的冰柜中冷凍12h，再在真空度10～15，溫度-80℃～-85℃，冷凍干燥24h～72h。

4.根據權利要求1所述的一種基于轉谷氨酰胺酶誘導交聯的甲殼素納米纖維/Nisin復合保鮮劑的制備方法，其特征在于，S2中所述的Nisin與甲殼素納米纖維的質量比為1：0.5～2。

5.根據權利要求1所述的一種基于轉谷氨酰胺酶誘導交聯的甲殼素納米纖維/Nisin復合保鮮劑的制備方法，其特征在于，S2中所述的混合溶液中Nisin濃度為3.0～5.0mg/mL。

6.根據權利要求1所述的一種基于轉谷氨酰胺酶誘導交聯的甲殼素納米纖維/Nisin復合保鮮劑的制備方法，其特征在于，S2中所述混合溶液最終的pH為4～8。

7.根據權利要求1所述的一種基于轉谷氨酰胺酶誘導交聯的甲殼素納米纖維/Nisin復合保鮮劑的制備方法，其特征在于，使用pH7.2的磷酸鹽緩沖溶液調節混合溶液的pH。

8.根據權利要求1所述的一種基于轉谷氨酰胺酶誘導交聯的甲殼素納米纖維/Nisin復合保鮮劑的制備方法，其特征在于，S2中所述溶解制備的溫度條件為40℃。

9.根據權利要求1所述的一種基于轉谷氨酰胺酶誘導交聯的甲殼素納米纖維/Nisin復合保鮮劑的制備方法，其特征在于，S2中所述的水浴恒溫震蕩的振蕩速度為200rpm/min，震蕩時間為50～60min。

10.權利要求1～9任一項所述制備方法制備得到的基于轉谷氨酰胺酶誘導交聯的甲殼素納米纖維/Nisin復合保鮮劑，其特征在于，所述的甲殼素納米纖維/Nisin復合保鮮劑采用轉谷氨酰胺酶誘導交聯甲殼素納米纖維與Nisin形成穩固的共價鍵，提高Nisin的穩定性；此外，甲殼素納米纖維的高表面體積比可以提供更多的結合位點對Nisin進行納米吸附，并利用納米級甲殼素的成膜性和抗菌活性與Nisin的抗菌特性進行協同抗菌，抑制絕大多數微生物的滋生繁殖。