[發(fā)明專利]一種乳酸殘留量的檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011278713.6
• 申請日: 2020-11-16
• 公開（公告）號: CN112326839B
• 公開（公告）日: 2022-08-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳玉娟;陳雯雯;萬金玉;邵萌;欒貽宏;郭學(xué)平
• 申請（專利權(quán)）人: 山東華熙海御生物醫(yī)藥有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/60
• 代理公司: 北京唐頌永信知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11755
• 代理人: 劉偉

本申請?zhí)峁┮环N乳酸殘留量的檢測方法，包括：利用無水乙醇提取待測樣品中的乳酸，制備待測溶液；使用高效液相色譜對待測溶液進行檢測；基于檢測結(jié)果計算所述待測樣品中乳酸的殘留量。本申請的方法中的色譜柱的柱效高，耐用性好，且流動相中不需要添加有機相，能夠有效地檢測透明質(zhì)酸中的乳酸殘留。

技術(shù)領(lǐng)域

本申請涉及透明質(zhì)酸的檢測領(lǐng)域，且更為具體地涉及一種乳酸殘留的檢測方法。

背景技術(shù)

透明質(zhì)酸(Hyaluronic acid，簡稱HA)又名玻璃酸，是由(1-3)-2-乙酰氨基-2-脫氧-D-葡萄糖(1-4)-D-葡萄醛酸雙糖重復(fù)單位所組成的高分子量的直鏈粘多糖。1934年由Meyer等人從牛玻璃球眼中首次提取獲得。透明質(zhì)酸以其獨特的分子結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)在機體內(nèi)顯示出多種重要的生理功能，如潤滑關(guān)節(jié)，調(diào)節(jié)血管壁的通透性，調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)，水電解質(zhì)擴散及運轉(zhuǎn)，促進創(chuàng)傷愈合等。尤為重要的是，透明質(zhì)酸具有特殊的保水作用，是目前發(fā)現(xiàn)的自然界中保濕性最好的物質(zhì)，被稱為理想的天然保濕因子，由于HA具有良好的保濕性、粘彈性、滲透性和延展性，同時無任何免疫原性和毒性，被廣泛應(yīng)用于化妝品、食品、醫(yī)藥和臨床治療等行業(yè)領(lǐng)域。

HA最初是從雞冠、眼球等動物組織中提取的，由于這些原料來源有限，且成本高，用提取法生產(chǎn)已不能滿足日益增加的HA在醫(yī)藥和化妝品生產(chǎn)方面的需要。為了擴大生產(chǎn)規(guī)模，降低生產(chǎn)成本，發(fā)酵法生產(chǎn)HA的工藝迅速發(fā)展起來。HA發(fā)酵使用的菌種為鏈球菌，其在發(fā)酵過程中產(chǎn)生小分子有機酸的總量遠(yuǎn)大于HA。在現(xiàn)有生產(chǎn)工藝條件下，發(fā)酵液中HA的產(chǎn)量達到6～10g/L，而乳酸的含量則為30～40g/L。發(fā)酵結(jié)束后，一般使用乙醇將HA沉淀并進一步純化，乳酸做為發(fā)酵液中含量最高的有機酸，對成品HA中的乳酸殘留量進行檢測可反映純化工藝效果及產(chǎn)品雜質(zhì)控制程度。

目前，小分子有機酸的檢測分析一般采用RP-C18色譜柱，流動相以pH為2～3的甲醇/乙腈-稀酸溶液為主，色譜填料長期在低pH環(huán)境下使用易造成鍵合相的水解，導(dǎo)致柱效不斷下降。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述問題，本申請的申請人在日常分析工作中偶然發(fā)現(xiàn)一種陽離子交換色譜柱，在較高柱溫下對乳酸的分析效果好，柱效高，且耐用性強，流動相中不需要添加有機相，由此建立了上述方法，用于透明質(zhì)酸相關(guān)產(chǎn)品中乳酸殘留的檢測。

為了解決上述技術(shù)問題，本申請專利采用的技術(shù)方案是：

1、一種乳酸殘留量的檢測方法，其特征在于，包括：

利用無水乙醇提取待測樣品中的乳酸，制備待測溶液；

使用高效液相色譜對待測溶液進行檢測；

基于檢測結(jié)果計算所述待測樣品中乳酸的殘留量。

2、根據(jù)項1所述的方法，其特征在于，所述待測樣品中包含有透明質(zhì)酸。

3、根據(jù)項1所述的方法，其特征在于，所述待測溶液的制備中，向每10g所述待測樣品中加入40～100ml的所述無水乙醇。

4、根據(jù)項1所述的方法，其特征在于，所述待測溶液的制備中，將所述待測樣品加入到所述無水乙醇中，混合均勻，形成混合溶液，然后將混合溶液密封，并進行超聲處理，之后將混合溶液轉(zhuǎn)移到容量瓶中，并用無水乙醇定容，然后取上清液揮干，得到固體混合物，之后用弱酸溶液溶解所述固體混合物，并定容，然后過濾，得到的濾液為待測溶液。

5、根據(jù)項4所述的方法，其特征在于，所述超聲處理時間為15～40min。

6、根據(jù)項4所述的方法，其特征在于，所述弱酸溶液為磷酸溶液，所述磷酸溶液的濃度為0.5wt％～1.2wt％。

7、根據(jù)項1所述的方法，其特征在于，所述高效液相色譜的色譜柱為陽離子交換色譜柱。