[發明專利]一種通用的豬支原體抗原含量快速檢測試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 202011277555.2
• 申請日: 2020-11-16
• 公開（公告）號: CN112485423A
• 公開（公告）日: 2021-03-12
• 發明（設計）人: 韋艷娜;熊祺琰;于巖飛;馮志新;王麗;劉蓓蓓;王佳;郝飛;韓蕊;邵國青
• 申請（專利權）人: 江蘇省農業科學院
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/543
• 代理公司: 南京匯盛專利商標事務所(普通合伙) 32238
• 代理人: 袁靜

本發明提供一種通用的豬支原體抗原含量快速檢測試劑盒及其應用，屬于生物工程技術領域。該試劑盒包括采用豬支原體抗原包被的酶標板和兔抗EF?Tu血清；所述兔抗EF?Tu血清是采用重組EF?Tu蛋白免疫新西蘭兔，采血分離血清后所得，所述重組EF?Tu蛋白的序列如SEQ ID NO:4所示。本發明試劑盒，該方法耗時短、準確性高、能檢測滅活疫苗中豬支原體抗原含量。

技術領域

本發明屬于生物工程技術領域，具體涉及一種通用的豬支原體抗原含量快速檢測試劑盒及其應用。

背景技術

支原體是能夠在自然界獨立生存的最小原核生物，迄今分離出的支原體達190余種，遍布于世界各地，種類多，影響面廣，危害很大。其中豬支原體在獸醫學上是一類重要的病原微生物，支原體病一般發病進程緩慢，發病率及死亡率較低，但能給生產造成巨大的經濟損失。如由豬肺炎支原體(Mycoplasma hyopneumoniae，Mhp)引起的豬支原體肺炎(Mycoplasmal pneumonia of swine，MPS)，廣泛發生于世界各地，臨床癥狀主要為咳嗽和氣喘，一般患豬死亡率不高，但嚴重降低飼料轉化率，長期生長發育不良，造成巨大的經濟損失。其他可危害豬只健康的還有豬鼻支原體(可引起多發性漿膜炎、關節炎等臨床癥狀，導致豬生長性能下降)、豬絮狀支原體(可引起支氣管發生輕微病變)、豬滑液支原體(可引起10周齡以上小豬關節炎)等。

目前，疫苗接種是預防控制豬支原體感染的關鍵措施，在疫苗研制過程中，抗原含量是重要的質量控制指標，與疫苗的實際效力密切相關。對于豬支原體抗原含量的測定，通常采用標準的顏色變化單位(CCU)計數法，但這種方法檢測的是培養收獲時活的支原體的量，因此只適合于活疫苗產品的質量評價，不適合用于滅活疫苗生產及成品疫苗的有效抗原含量檢測，同時該方法測定周期長，還會受到檢測血清、檢測容器、平行數測定、采樣時間等影響。

現有技術中缺乏能夠用于滅活疫苗的高效、準確檢測豬支原體抗原含量的方法。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是克服現有技術之缺陷，提供一種通用的豬支原體抗原含量快速檢測試劑盒，以解決支原體傳統定量檢測方法費時長、準確性低、不能檢測滅活疫苗中豬支原體抗原含量的弊端。

本發明的另一目的是提供以非診斷為目的采用所述試劑盒檢測豬支原體抗原含量的方法，該方法耗時短、準確性高、能檢測滅活疫苗中豬支原體抗原含量。

本發明的目的采用如下技術方案實現。

一種通用的豬支原體抗原含量快速檢測試劑盒，包括采用豬支原體抗原包被的酶標板和兔抗EF-Tu血清；所述兔抗EF-Tu血清是采用重組EF-Tu蛋白免疫新西蘭兔，采血分離血清后所得，所述重組EF-Tu蛋白的序列如SEQ ID NO:4所示。

在本發明中，所述酶標板采用豬支原體裂解液進行包被。

在本發明中，所述重組EF-Tu蛋白是通過誘導表達攜帶EF-Tu蛋白編碼基因的重組菌所得。

在本發明中，所述酶標板采用豬支原體裂解液進行包被后采用含有明膠的PBS緩沖液封閉。

在本發明中，所述試劑盒還包括豬支原體抗原菌液標準品、PBST溶液和羊抗兔HRP-IgG、顯色液和終止液。

在本發明中，PBST溶液是含體積百分濃度為0.05％Tween-20的PBS緩沖液；所述羊抗兔HRP-IgG購自武漢博士德生物公司，產品編號是BA1054。

在本發明中，所述豬支原體包括豬肺炎支原體、豬鼻支原體、豬絮狀支原體、豬滑液支原體。

本發明還提供以非診斷為目的采用所述試劑盒檢測的豬支原體抗原含量的方法，包括如下步驟：