[發明專利]一種通用的豬支原體抗原含量快速檢測試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 202011277555.2
• 申請日: 2020-11-16
• 公開（公告）號: CN112485423A
• 公開（公告）日: 2021-03-12
• 發明（設計）人: 韋艷娜;熊祺琰;于巖飛;馮志新;王麗;劉蓓蓓;王佳;郝飛;韓蕊;邵國青
• 申請（專利權）人: 江蘇省農業科學院
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/543
• 代理公司: 南京匯盛專利商標事務所(普通合伙) 32238
• 代理人: 袁靜

1.一種通用的豬支原體抗原含量快速檢測試劑盒，其特征在于包括采用豬支原體抗原包被的酶標板和兔抗EF-Tu血清；所述兔抗EF-Tu血清是采用重組EF-Tu蛋白免疫新西蘭兔，采血分離血清后所得，所述重組EF-Tu蛋白的序列如SEQ ID NO:4所示。

2.根據權利要求1所述通用的豬支原體抗原含量快速檢測試劑盒，其特征在于所述酶標板采用豬支原體裂解液進行包被。

3.根據權利要求1或2所述通用的豬支原體抗原含量快速檢測試劑盒，其特征在于所述重組EF-Tu蛋白是通過誘導表達攜帶EF-Tu蛋白編碼基因的重組菌所得。

4.根據權利要求3所述通用的豬支原體抗原含量快速檢測試劑盒，其特征在于所述酶標板采用豬支原體裂解液進行包被后采用含有明膠的PBS緩沖液封閉。

5.根據權利要求4所述通用的豬支原體抗原含量快速檢測試劑盒，其特征在于所述試劑盒還包括豬支原體抗原菌液標準品、PBST溶液和羊抗兔HRP-IgG、顯色液和終止液。

6.根據權利要求5所述通用的豬支原體抗原含量快速檢測試劑盒，其特征在于PBST溶液是含體積百分濃度為0.05％Tween-20的PBS緩沖液；所述羊抗兔HRP-IgG購自武漢博士德生物公司，產品編號是BA1054。

7.根據權利要求6所述通用的豬支原體抗原含量快速檢測試劑盒，其特征在于所述豬支原體包括豬肺炎支原體、豬鼻支原體、豬絮狀支原體、豬滑液支原體。

8.以非診斷為目的采用權利要求1中所述試劑盒檢測的豬支原體抗原含量的方法，其特征在于包括如下步驟：

(1)在豬支原體抗原包被的酶標板中，設置待檢樣品孔和空白對照樣品孔，在待檢樣品孔中加入待檢樣品，在空白對照樣品孔中加入PBS緩沖液，然后每孔加入兔抗EF-Tu血清，孵育后PBST溶液洗滌；

(2)每孔加入羊抗兔HRP-IgG，孵育；

(3)PBST溶液洗滌后，加入TMB底物顯色液；

(4)加入終止液終止反應，在450nm處讀取吸光值；

(5)根據標準曲線計算豬支原體抗原含量。

9.權利要求1所述試劑盒在檢測豬支原體培養物或者豬支原體疫苗產品中抗原含量的應用。