[發明專利]一種熱啟動DNA聚合酶及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202011277378.8
• 申請日: 2020-11-16
• 公開（公告）號: CN112359031A
• 公開（公告）日: 2021-02-12
• 發明（設計）人: 許秀麗;周裕軍;常緣榮
• 申請（專利權）人: 北京丹大生物技術有限公司
• 主分類號: C12N9/12
• 分類號: C12N9/12;C12N15/54;C12Q1/686
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 呂紀濤

1.一種熱啟動DNA聚合酶，其特征在于，將雙酸酐對DNA聚合酶進行修飾，得到熱啟動DNA聚合酶；

所述雙酸酐的結構通式如式I所示：

R1和R2均為氫或有機基，所述有機基包括氫、烷基、氨基、磺酸基或鹵素。

2.根據權利要求1所述的熱啟動DNA聚合酶，其特征在于，所述雙酸酐包括1,2,3,4-苯四甲酸二酸酐、3,6-二氯-1,2,4,5-苯四甲酸二酸酐、3,6-二甲基-1,2,4,5-苯四甲酸二酸酐、3,6-二羥基-1,2,4,5-苯四甲酸二酸酐和均苯四甲酸二酐中的一種或幾種。

3.根據權利要求1所述的熱啟動DNA聚合酶，其特征在于，所述DNA聚合酶包括Taq DNA聚合酶、Klenow DNA聚合酶、pfu DNA聚合酶、KOD DNA聚合酶、Bst DNA聚合酶和phi29 DNA聚合酶中的一種或幾種。

4.權利要求1～3任一項所述的熱啟動DNA聚合酶的制備方法，其特征在于，包括：將雙酸酐溶液與DNA聚合酶溶液混合，得到混合液，將所述混合液在1～6℃下處理8-24h，得到熱啟動DNA聚合酶。

5.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述混合液中雙酸酐和DNA聚合酶的摩爾比為200～1000:1。

6.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述處理的溫度為4℃。

7.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述雙酸酐溶液的溶劑包括二甲基亞砜。

8.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述DNA聚合酶溶液的溶劑包括Tris緩沖液；所述Tris緩沖液的組分包括50mM Tris-HCl、1mM EDTA和50mM KCl，pH值為7.5。

9.權利要求1～3任一項所述的熱啟動DNA聚合酶在核酸擴增反應中的應用。