[發(fā)明專利]一種金果欖組織培養(yǎng)方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011276423.8
• 申請日: 2020-11-16
• 公開（公告）號: CN112273236A
• 公開（公告）日: 2021-01-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊玉霞;陳華;周先建;胡平;陳鐵柱;方清茂;余馬
• 申請（專利權(quán)）人: 四川省中醫(yī)藥科學(xué)院;西南科技大學(xué)
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11246
• 代理人: 趙浩竹

1.一種金果欖組織培養(yǎng)方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟一：獲取無菌外植體

首先選取健壯、腋芽飽滿的金果欖枝條，剪去莖段上的葉片，形成1-2cm長短的莖段，每個莖段帶一個腋芽，然后放入燒杯中，并滴入2-3滴洗潔精，加入自來水進(jìn)行震蕩，燒杯頂部用紗布包裹，并置于自來水下沖洗30min；然后在超凈工作臺上先用75％酒精浸潤莖段30s，接著用無菌水沖洗2-3次，然后倒入0.1％HgCl₂，滴入1-2滴吐溫-20，震蕩消毒4-7min，無菌水沖洗4-5遍；然后將滅菌后的莖段接種到無激素的MS培養(yǎng)基上。

步驟二：啟動培養(yǎng)基的篩選

7天后將無污染的莖段接種到9種MS+不同濃度組合BAP和NAA組成的啟動培養(yǎng)基中，然后4周后統(tǒng)計(jì)出芽率；

步驟三：增殖培養(yǎng)基的篩選

將誘導(dǎo)出的腋芽從莖段上切下，接種到9種MS+不同濃度組合的TDZ、BAP和NAA組成的增殖培養(yǎng)基，6周后統(tǒng)計(jì)增殖系數(shù)和平均苗高；

步驟四：生根和移栽

將增殖后的叢生芽分成單株，接種到無激素的1/2MS培養(yǎng)基中進(jìn)行生根，4周后統(tǒng)計(jì)生根數(shù)和平均根長；將生根后的金果欖采取逐步開瓶的方式，第一天擰松蓋子、第二天蓋子開一半，持續(xù)二天，第三天蓋子開2/3，持續(xù)二天，第六天蓋子全部打開，持續(xù)一天，第七天把組培苗從瓶子中取出，洗凈根部的培養(yǎng)基，移栽到基質(zhì)上，2周后統(tǒng)計(jì)成活率。

步驟五：給出統(tǒng)計(jì)方法

污染率＝(污染的苗數(shù)/總苗數(shù))×100％；

褐化率＝(褐化的苗數(shù)/總苗數(shù))×100％；

出芽率＝(萌發(fā)的苗數(shù)/總苗數(shù))×100％；

增殖系數(shù)＝增殖株數(shù)/接種株數(shù)

數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS通過單因素方差分析，P＜0.05表示有顯著性差異。

步驟六：得出最優(yōu)的培養(yǎng)方法

根據(jù)統(tǒng)計(jì)出的數(shù)據(jù)得出金果欖最優(yōu)的組織培養(yǎng)方法。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種金果欖組織培養(yǎng)方法，其特征在于，在步驟一中，所述無激素的MS培養(yǎng)基含30g蔗糖、7g瓊脂，pH為5.8；每個時間處理莖段10個，重復(fù)3次，7天統(tǒng)計(jì)污染率和褐化率，培養(yǎng)溫度為24±2℃，光照強(qiáng)度2000lx，光照時間12h/d。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種金果欖組織培養(yǎng)方法，其特征在于，在步驟四中，所述基質(zhì)的材料為泥炭、腐殖質(zhì)和園土，且所述泥炭、腐殖質(zhì)和園土的成分比例為1:1:3。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種金果欖組織培養(yǎng)方法，其特征在于，在步驟六中，根據(jù)統(tǒng)計(jì)出的數(shù)據(jù)得出的結(jié)果包括有：不同啟動培養(yǎng)基影響莖段萌發(fā)，TDZ、BAP和NAA不同濃度組合影響組培苗增殖以及HgCl₂處理時間對莖段污染率和褐化率的影響。