[發(fā)明專利]一種赤芝水提物蛋白成分及其分析與鑒定方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011276187.X
• 申請(qǐng)日: 2020-11-16
• 公開（公告）號(hào): CN112415124A
• 公開（公告）日: 2021-02-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 丁自勉;馬藝沔
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所
• 主分類號(hào): G01N30/89
• 分類號(hào): G01N30/89;G01N1/28
• 代理公司: 北京坦路來專利代理有限公司 11652
• 代理人: 林樂飛

本申請(qǐng)涉及赤芝水提物中的蛋白成分及其分析與鑒定方法。本申請(qǐng)首次提供了赤芝水提物中最為豐富的8種蛋白質(zhì)成分。分別為赤芝微波水提物中最為豐富的蛋白質(zhì)成分SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6，以及靈芝切片液氮研磨水提物中最豐富的兩種成分SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8。所述赤芝水提物中的蛋白分析鑒定方法主要包括通過聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白或肽段，通過膠內(nèi)酶切的方法切割，通過納升級(jí)反相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜方法對(duì)肽段成分及離子強(qiáng)度進(jìn)行鑒定，及利用Maxquant軟件搜索亞洲赤芝數(shù)據(jù)庫對(duì)蛋白質(zhì)成分進(jìn)行分析，比對(duì)美國國立信息中心蛋白數(shù)據(jù)庫并對(duì)蛋白功能進(jìn)行分析。

技術(shù)領(lǐng)域

本申請(qǐng)涉及一種赤芝水提物中蛋白質(zhì)及其水解多肽成分，及其分析與鑒定的方法。

背景技術(shù)

靈芝是我國傳統(tǒng)名貴中藥材。《中國藥典》中收錄靈芝中的赤芝Ganodermalucidum(Leyss.ex Fr.)Karst.和紫芝Ganoderma sinense Zhao,Xu et Zhang兩個(gè)品種^[1]。其中，赤芝味苦平，多用于治療各種肝臟和心腦血管疾病，為靈芝中的代表種。紫芝味甘溫，多用于食療保健。近20年來，赤芝已實(shí)現(xiàn)了人工種植，廣泛用于人們的醫(yī)療保健過程中。經(jīng)本草考證和歷史文獻(xiàn)考實(shí)，浙江、安徽為赤芝的道地產(chǎn)區(qū)，可作為開發(fā)赤芝藥用資源的首選地^[2]。

隨著生物技術(shù)的發(fā)展，赤芝的基因組已經(jīng)得到了測(cè)定。赤芝(G.lucidum)為一種具有很大的種內(nèi)多樣性的復(fù)合物種。據(jù)報(bào)道，歐洲和東亞的赤芝在形態(tài)、分子親緣關(guān)系與三萜成分都有所不同^[3-4]。目前，已在美國國立生物技術(shù)信息中心(National Center forBiotechnology Information,NCBI)公布了亞洲赤芝(G.lucidum)基因組的組裝序列，所測(cè)序的赤芝菌株包括BCRC 36111、BCRC37177^[5]、G.260125-1^[6]以及Xiangnong No.1^[7]。其中代表性的赤芝序列為2012年Chen等發(fā)布的赤芝(G.260125-1)的基因組數(shù)據(jù)^[6]。該赤芝菌株是從原生質(zhì)體單核化而得來，雙核菌株CGMCC5.0026屬于亞洲G.lucidum類群，來源于中國普通微生物菌種保藏管理中心。這些亞洲靈芝品種的基因組注釋并不十分完善，由基因組預(yù)測(cè)的蛋白質(zhì)大部分也尚未公布。迄今為止，在NCBI中能查到的亞洲赤芝蛋白質(zhì)僅有697個(gè)，其中非重復(fù)蛋白僅有357個(gè)。2013年，美國能源部聯(lián)合基因組研究所(TheU.S.Department of Energy Joint Genome Institute,JGI)也發(fā)表了北美赤芝(Ganoderma lucidum sp.10597)的基因組數(shù)據(jù)，參見https://genome.jgi.doe.gov/Gansp1/Gansp1.home.html^[8]。其中，北美赤芝(Ganoderma lucidum sp.10597)基因組序列注釋較完整，預(yù)測(cè)得出289550個(gè)蛋白序列已公布。

中國傳統(tǒng)靈芝服用方法為水煎或燉煮，其中尤以赤芝水煎服對(duì)多種疾病具有良好療效。研究表明，赤芝水提物具有多種藥理學(xué)活性^[9-10]。赤芝水提物中的主要成分包含多糖、三萜、蛋白及其水解肽類物質(zhì)。以往認(rèn)為赤芝多糖與三萜類物質(zhì)是赤芝的主要活性成分^[11]。但是，有關(guān)報(bào)道表明，靈芝蛋白有多種類型，包括真菌免疫調(diào)節(jié)蛋白、凝集素、糖蛋白、酶等，在靈芝發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗氧化、抗菌和抗病毒方面具有顯著效果^[12]。在前期研究中，申請(qǐng)人獲得一種中國赤芝通過微波處理得到的水提取物，該水提物具有較為顯著的抗菌消炎的特性，但其中的蛋白類成分尚不清楚。隨著質(zhì)譜技術(shù)的發(fā)展，質(zhì)譜技術(shù)越來越多地用于蛋白質(zhì)或多肽的高通量解析與含量測(cè)定。然而，迄今為止，尚未見到利用質(zhì)譜技術(shù)分析與鑒定赤芝水提物中蛋白質(zhì)及多肽類成分的相關(guān)報(bào)道。可見，中國赤芝中的蛋白序列和功能還有很多尚未揭示。

參考文獻(xiàn)