[發(fā)明專利]一種仿生靶向巨噬細(xì)胞光學(xué)成像劑的制備方法及其在巨噬細(xì)胞相關(guān)疾病診斷的應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011275823.7
• 申請(qǐng)日: 2020-11-16
• 公開（公告）號(hào): CN112402628A
• 公開（公告）日: 2021-02-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 謝明星;吳雅;高瑭;張麗;靳巧鋒;陳逸寒;宋怡姝;李問渠;李慧玲;鄧誠(chéng)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院
• 主分類號(hào): A61K49/00
• 分類號(hào): A61K49/00
• 代理公司: 武漢信合紅谷知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 42264
• 代理人: 解波

本發(fā)明涉及生物材料合成及應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域，具體公開了一種仿生靶向巨噬細(xì)胞光學(xué)成像劑的制備方法及其在巨噬細(xì)胞相關(guān)疾病診斷的應(yīng)用，制備方法包括以下步驟：步驟a：合成聚集誘導(dǎo)發(fā)光效應(yīng)的2?(2’?羥基苯基)苯并唑類化合物(AIEgen)；步驟b：提取主要成分為β?1,3?D的酵母微囊(GPs)；步驟c：將步驟a中的AIEgen溶于無水乙醇中配置1mM母液，4℃保存，將步驟b中GPs溶于PBS配置成10mg/mL的混懸液，孵育1h，隨后，以體積比1:10的比例將AIEgen與GPs混勻，孵育24h，離心，洗滌，收集樣品。該系統(tǒng)通過模擬真菌感染途徑可被體內(nèi)巨噬細(xì)胞特異性吞噬，受病變部位急劇增多趨化因子的招募，攜載酵母微囊光學(xué)成像劑的巨噬細(xì)胞會(huì)大量遷移至病變部位，實(shí)現(xiàn)巨噬細(xì)胞相關(guān)疾病的無創(chuàng)診斷。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物材料合成及應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種仿生靶向巨噬細(xì)胞光學(xué)成像劑的制備方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)

巨噬細(xì)胞在宿主防御中發(fā)揮重要功能，其在免疫調(diào)節(jié)、器官發(fā)育及器官功能上有著重要作用，在各種疾病中發(fā)揮著調(diào)節(jié)作用。其中腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞是腫瘤組織中的巨噬細(xì)胞，從腫瘤起始到加速進(jìn)展和轉(zhuǎn)移，均起著關(guān)鍵作用，其數(shù)量與多種腫瘤的惡性程度和不良預(yù)后有關(guān)。此外，巨噬細(xì)胞參與多種炎癥性疾病的發(fā)病進(jìn)程，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的發(fā)生發(fā)展，動(dòng)脈粥樣硬化，由感染導(dǎo)致全身炎癥反應(yīng)的膿毒癥，炎癥性肺損傷，炎癥性肝損傷等。大量研究表明器官移植排斥反應(yīng)發(fā)生時(shí)移植物中巨噬細(xì)胞的數(shù)量增加，例如心臟移植急性排斥反應(yīng)發(fā)生時(shí)心肌組織中的巨噬細(xì)胞數(shù)量顯著增多，腎移植早期巨噬細(xì)胞數(shù)量也是顯著增加的，另外有文獻(xiàn)指出腎移植病理活檢中巨噬細(xì)胞的密度可預(yù)測(cè)移植腎功能。目前，已有研究表明，巨噬細(xì)胞相關(guān)疾病發(fā)生時(shí)，巨噬細(xì)胞將會(huì)像單核細(xì)胞一樣直接快速不經(jīng)循環(huán)地被招募至病變組織，這一生物學(xué)特性為靶向巨噬細(xì)胞成像病變部位奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。因此，對(duì)巨噬細(xì)胞進(jìn)行實(shí)時(shí)長(zhǎng)期監(jiān)測(cè)可實(shí)現(xiàn)巨噬細(xì)胞相關(guān)疾病的早期診斷及病理進(jìn)程評(píng)估，為臨床早期干預(yù)和預(yù)后評(píng)估提供必要信息。

目前，示蹤巨噬細(xì)胞的方式主要有正電子發(fā)射計(jì)算機(jī)斷層顯像(PET)、磁共振成像(MRI)、電子計(jì)算機(jī)X線斷層扣描(CT)和熒光成像。PET能夠?qū)崿F(xiàn)定量成像，但存在輻射且對(duì)儀器要求較高，此外還無法提供精確的解剖學(xué)定位。MRI無輻射，能夠清楚定位解剖位置，但存在空間分辨率較差的缺陷，無法實(shí)現(xiàn)早期精確診斷。CT雖然是臨床最常用的診斷手段，但示蹤巨噬細(xì)胞需要大量納米顆粒，通常毒性較高。與臨床常用的PET、MRI、CT等影像方法相比，熒光成像具有快速、無創(chuàng)、實(shí)時(shí)、靈敏、無輻射等優(yōu)點(diǎn)，在疾病的早期檢測(cè)和術(shù)中引導(dǎo)手術(shù)治療等方面發(fā)揮著重要的作用。目前，大多數(shù)關(guān)于細(xì)胞靶向性研究主要通過熒光成像手段驗(yàn)證，因此熒光成像成為巨噬細(xì)胞示蹤的理想成像方式。

例如，申請(qǐng)?zhí)枮?01911279822.7，專利名稱為“一種巨噬細(xì)胞示蹤熒光探針的制備方法及其應(yīng)用”的發(fā)明專利公開了一種巨噬細(xì)胞示蹤熒光探針的制備方法，包括以下步驟：

S110、將羧甲基化葡聚糖、NHS或sulfo-NHS中的一個(gè)、和活化羧基試劑置于緩沖液中，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)得到活化好的羧甲基化葡聚糖溶液；

S120、將交聯(lián)劑溶解在緩沖液中，加入活化好的羧甲基化葡聚糖溶液，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)后得到澄清溶液；

S130、將澄清溶液滴加至預(yù)冷的無水乙醇中去，離心得到沉淀，將得到的沉淀復(fù)溶于水，過微濾膜得到過濾液；

S140、將過濾液進(jìn)行室溫透析，透析結(jié)束后過濾膜，于第一溫度下預(yù)凍后轉(zhuǎn)移至第二溫度下冷凍,再冷凍干燥得到凍干粉；

S150、將活化羧基試劑、NHS溶于二甲基亞砜中，加入示蹤小分子，示蹤小分子活化后加之凍干粉的水溶液中，避光室溫反應(yīng)得到反應(yīng)液；

S160、將反應(yīng)液中的游離造影小分子去除后濃縮得到濃縮液；

S170、將丁二酸酐溶于二甲基亞砜中，加入催化量三乙胺與所述濃縮液避光室溫反應(yīng)，室溫透析后過微濾膜，得到巨噬細(xì)胞示蹤熒光探針。