[發明專利]一種用于檢測轉基因大豆SHZD32-1的RPA引物和探針組合及現場快速檢測方法

在審

• 申請號: 202011270769.7
• 申請日: 2020-11-13
• 公開（公告）號: CN112359127A
• 公開（公告）日: 2021-02-12
• 發明（設計）人: 汪小福;陳欲;徐俊鋒;陳笑蕓;彭城;徐曉麗;魏巍;楊蕾
• 申請（專利權）人: 浙江省農業科學院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 王煥

1.一種用于檢測轉基因大豆SHZD32-1的RPA引物和探針組合，其特征在于，所述引物包括正向引物和反向引物；

所述正向引物和所述反向引物分別選自以下的任一組：

所述正向引物為SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，所述反向引物為SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列；

所述正向引物為SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，所述反向引物為SEQ ID NO.7所示的核苷酸序列；

所述正向引物為SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，所述反向引物為SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列；

所述正向引物為SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列，所述反向引物為SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列；或

所述正向引物為SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列，所述反向引物為SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列；

所述探針的核苷酸序列為SEQ ID NO.9所示的核苷酸序列；其中用連接有熒光基團的T代替探針第29個堿基T，用連接有淬滅基團的T代替第34個堿基T，用四氫呋喃殘基THF代替第31個堿基A。

2.根據權利要求1所述的RPA引物和探針組合，其特征在于，所述正向引物為SEQ IDNO.1所示的核苷酸序列，所述反向引物為SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列。

3.一種用于檢測轉基因大豆SHZD32-1的試劑盒，其特征在于，包含如權利要求1或2所述的RPA引物和探針組合。

4.一種用于轉基因大豆SHZD32-1的現場快速檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

(A)提取待測樣品中的DNA；

(B)以步驟(A)中提取的DNA為模板，用權利要求1或2所述的RPA引物和探針進行RPA擴增反應；

(C)分析RPA擴增產物。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述步驟(A)包括：樣品快速研磨、過濾、吸附以及回收DNA的步驟；優選的，所述過濾、吸附以及回收DNA的步驟采用DNA提取裝置進行。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述DNA提取裝置包括過濾管、吸附管、螺口接頭和注射器；

其中，所述過濾管和所述吸附管為下端帶有連接管的螺口管，其上端能夠與所述螺口接頭連接；

所述螺口接頭的上端帶有連接管，能夠與所述過濾管和吸附管的下端連接管以及所述注射器連接。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述吸附管內部設置有吸附膜用于吸附DNA；優選地，所述吸附膜為二氧化硅硅膠膜；更優選地，所述吸附膜為4-8層。

8.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述步驟(C)中，通過熒光燈照射直接判別檢測結果。

9.根據權利要求4-8中任一項所述的方法，其特征在于，RPA擴增反應的條件為溫度為37℃-39℃，擴增反應的時間為15-20min。

10.權利要求1或2所述的RPA引物和探針組合或權利要求3所述的試劑盒在檢測在檢測轉基因大豆SHZD32-1中的應用。