[發(fā)明專利]構(gòu)建原位原發(fā)胃癌動(dòng)物模型的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011266740.1
• 申請(qǐng)日: 2020-11-12
• 公開（公告）號(hào): CN114480250B
• 公開（公告）日: 2023-09-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳崇;陸政昊;劉玉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 四川大學(xué)華西醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12N5/071
• 分類號(hào): C12N5/071;C12N5/10;A01K67/027;A61K49/00
• 代理公司: 成都高遠(yuǎn)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李高峽;張娟

本發(fā)明公開了一種原位原發(fā)的胃癌腫瘤模型制備方法，屬于腫瘤動(dòng)物模型領(lǐng)域。本發(fā)明通過將小鼠胃上皮細(xì)胞以特定培養(yǎng)基培養(yǎng)成類器官，再將類器官進(jìn)行遺傳改造，注射回小鼠胃，使其發(fā)展成腫瘤。本發(fā)明的方法相比移植瘤動(dòng)物模型，具有明確的基因突變背景，能夠有效模擬人體胃癌發(fā)生發(fā)展的真實(shí)過程。相比基因工程腫瘤動(dòng)物模型，本發(fā)明可以高效構(gòu)建具有不同基因突變背景的胃癌小鼠模型，耗時(shí)短，成本低，成瘤率高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于腫瘤動(dòng)物模型領(lǐng)域。

背景技術(shù)

胃癌已成為我國發(fā)病率第二，死亡率第三的腫瘤。然而近二十年來，胃癌的臨床治療并未取得突破性進(jìn)展。深入了解胃癌發(fā)生機(jī)制，找到其中的關(guān)鍵作用因子，進(jìn)而研發(fā)更加有效的治療手段，顯得尤為迫切。腫瘤動(dòng)物模型在探究腫瘤發(fā)生發(fā)展機(jī)制、研發(fā)新藥物上扮演著至關(guān)重要角色。小鼠胃癌模型為研究胃癌發(fā)生與轉(zhuǎn)移機(jī)制、抗腫瘤藥物篩選、免疫治療評(píng)價(jià)等方面、提供有力的工具。

目前，常用的小鼠胃癌模型，主要包括移植瘤模型和自發(fā)成瘤模型。移植瘤模型是采用的免疫缺陷小鼠(如無胸腺裸鼠、SCID小鼠)作為移植受體,將腫瘤細(xì)胞(細(xì)胞系)或腫瘤組織塊移植進(jìn)免疫缺陷鼠體內(nèi)后形成移植腫瘤。自發(fā)成瘤模型主要包括：基因工程小鼠胃癌模型和化學(xué)誘導(dǎo)小鼠胃癌模型。已有報(bào)道的基因工程小鼠胃癌模型主要包括:INS-GAS小鼠、TFF-1敲除小鼠和RunnX3敲除小鼠。這些小鼠均是利用小鼠胚胎干細(xì)胞的基因同源重組，將特定基因在小鼠基因組上敲除或敲入。化學(xué)誘導(dǎo)小鼠胃癌模型，是利用化學(xué)致癌物質(zhì)長期刺激誘發(fā)胃癌發(fā)生，常用的藥物包括亞硝基化合物MNNG和MNU。

但是，目前的小鼠胃癌模型存在諸多缺點(diǎn)，在滿足基礎(chǔ)以及臨床前研究需求都存在不足。小鼠移植瘤胃癌模型一直都飽受爭議，因?yàn)橐浦擦霾⒎切∈髾C(jī)體自發(fā)形成的腫瘤，不能反映體內(nèi)腫瘤形成的真實(shí)過程；更重要的是，機(jī)體的免疫系統(tǒng)在腫瘤形成過程中十分重要，而免疫缺陷小鼠缺乏完整的免疫系統(tǒng)，利用移植瘤胃癌模型已經(jīng)不能滿足腫瘤免疫學(xué)治療研究的需要。基于基因工程小鼠的自發(fā)成瘤模型因其類似人體內(nèi)腫瘤的發(fā)生過程而得到認(rèn)可，但是腫瘤的發(fā)生是多個(gè)基因累積改變的過程，傳統(tǒng)基因工程小鼠單次只引入一至兩個(gè)基因改變，若想獲得多個(gè)基因突變小鼠，需要多次交配迭代；耗時(shí)長，若要同時(shí)獲得大量相同基因型的腫瘤小鼠，需要更多的親代小鼠，研究成本提高。同時(shí)，由于基因工程小鼠是生殖系突變，容易誘發(fā)多系統(tǒng)多器官的腫瘤，這與腫瘤實(shí)際發(fā)生情況也有差異；并且由于小鼠個(gè)體差異，自發(fā)成瘤的周期差異也較大，難以達(dá)到同步。更重要的是，基因工程小鼠構(gòu)建技術(shù)門檻高，若要構(gòu)建新的基因型小鼠模型周期長成本高，一般研究機(jī)構(gòu)無法常規(guī)開展。對(duì)于化學(xué)誘導(dǎo)小鼠胃癌模型，該類模型構(gòu)建時(shí)間相對(duì)較長，成瘤具有明顯的個(gè)體差異，高異質(zhì)性可能會(huì)造成后期數(shù)據(jù)的處理難度增加，文獻(xiàn)報(bào)道，總體成瘤在50％左右。最重要的是該類模型缺乏明確的基因操作，不適用于發(fā)病機(jī)理研究。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種更接近胃癌生物學(xué)特性、且制備周期短的原位原發(fā)胃癌模型。

為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供了以下技術(shù)方案：

一種構(gòu)建原位原發(fā)胃癌動(dòng)物模型的方法，其特征在于，包括：

將遺傳改造的胃類器官注射到動(dòng)物胃組織內(nèi)；

所述遺傳改造是指敲除抑癌基因，和/或過表達(dá)癌基因。

進(jìn)一步地，所述遺傳改造具體為如下任一情形：

a.敲除TP53、PTEN、SMAD4基因；

b.敲除TP53、APC、CDKN2A、MLL3基因；

c.敲除TP53、CDH1、ARID1A基因，過表達(dá)MYC基因。

進(jìn)一步地，所述胃癌為胃腺癌。

進(jìn)一步地，所述遺傳改造還包括對(duì)類器官轉(zhuǎn)入熒光標(biāo)記基因。

進(jìn)一步地，所述動(dòng)物是小鼠。