[發明專利]一種檢測甲草胺的試紙條及其應用

有效

• 申請號: 202011266446.0
• 申請日: 2020-11-13
• 公開（公告）號: CN112462070B
• 公開（公告）日: 2023-07-11
• 發明（設計）人: 王兆芹;馬玉華;賈芳芳;王琳琛;萬宇平;何方洋
• 申請（專利權）人: 北京望爾生物技術有限公司;北京勤邦科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/58
• 分類號: G01N33/58;G01N33/577;G01N33/558;G01N33/53
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本發明公開了一種檢測甲草胺的試紙條及其應用。試紙條包括樣品吸收墊(1)、結合物釋放墊(2)、反應膜(3)、吸水墊(4)和底板(7)，所述反應膜上具有包被有甲草胺半抗原?載體蛋白偶聯物的檢測線(5)和包被有羊抗鼠抗抗體的質控線(6)，所述結合物釋放墊(2)噴涂有甲草胺單克隆抗體?膠體金標記物。本發明還提供了一種應用上述甲草胺試紙條檢測農作物中甲草胺殘留的方法。本發明所提供的試紙條具有操作簡單、靈敏度高、檢測速度快、成本低等特點，適合大量樣本的篩查和現場監控。

技術領域

本發明涉及一種檢測甲草胺的試紙條及其應用，具體涉及一種用于檢測甲草胺的膠體金試紙條，其特別適用于農作物中甲草胺殘留的檢測。

背景技術

甲草胺是酰胺類除草劑，對禾本科雜草有較好的效果，主要用于大豆、玉米、花生、甘蔗，也可用于非砂性土壤種植的棉花、油菜、馬鈴薯、洋蔥、辣椒、甘藍等作物，可防治一年生雜草，能有效防除大多數禾本科雜草，但對多數雙子葉和多年生雜草的防除效果差，甚至無效。甲草胺對人畜低毒，以前人們認為甲草胺沒有致畸和致癌作用，但是90年代后，更多的研究認為甲草胺為致癌物，美國FDA規定：大豆、玉米的最大殘留限量為0.2mg/kg；棉籽、新鮮玉米0.05mg/kg。

檢測甲草胺的方法有氣相色譜法、氣相色譜-質譜法等。與上述方法相比，免疫化學檢測法對藥物檢測具有快速、特異、靈敏、準確、可以批量監測、樣品處理簡單、能實現自動化操作等優點。而免疫化學法檢測甲草胺的前提是需要具備針對甲草胺的抗體，本申請發明了甲草胺人工抗原制備方法，并將其應用于快速檢測試紙條中，用時短，操作簡單，成本較低，適用于基層單位大批量地檢測樣品。

發明內容

本發明的目的是提供一種靈敏度高、操作簡單、成本低、檢測時間短的甲草胺殘留檢測試紙條。

本發明所提供的檢測甲草胺殘留的試紙條，包括樣品吸收墊(1)、結合物釋放墊(2)、反應膜(3)、吸水墊(4)和底板(7)；所述反應膜上具有包被有甲草胺半抗原-載體蛋白偶聯物的檢測線(5)和包被有羊抗鼠抗抗體的質控線(6)，所述結合物釋放墊(2)噴涂有甲草胺單克隆抗體-膠體金標記物。

所述甲草胺半抗原-載體蛋白偶聯物是由甲草胺半抗原與載體蛋白偶聯得到，所述載體蛋白為牛血清白蛋白、卵清蛋白、血藍蛋白、甲狀腺蛋白、人血清白蛋白。

所述甲草胺單克隆抗體是以甲草胺半抗原-載體蛋白偶聯物作為免疫原制備獲得，是由甲草胺單克隆抗體雜交瘤細胞株分泌獲得；所述羊抗鼠抗抗體是將鼠源抗體免疫羊得到。

所述樣品吸收墊(1)、結合物釋放墊(2)、反應膜(3)、吸水墊(4)依次粘貼在底板(7)上，所述結合物釋放墊1/3～1/2被覆蓋于樣品吸收墊下。

所述底板可為PVC底板或其他硬質不吸水的材料；所述樣品吸收墊可為吸濾紙或濾油紙；所述結合物釋放墊可為玻璃棉或聚酯材料；所述吸水墊為吸水紙；所述反應膜可為硝酸纖維素膜或醋酸纖維素膜。

本發明的另一個目的是提供一種制備上述試紙條的方法，其包括步驟：

1)制備噴涂有甲草胺單克隆抗體-膠體金標記物的結合物釋放墊；

2)制備具有包被有甲草胺半抗原-載體蛋白偶聯物的檢測線和包被有羊抗鼠抗抗體的質控線的反應膜；

3)將1)和2)制備好的結合物釋放墊、反應膜與樣品吸收墊、吸水墊和底板組裝成試紙條。

具體地說，步驟包括：

1)半抗原制備：將甲草胺與氯甲基甲基醚等物質經過一系列化學反應得到甲草胺半抗原；

2)將甲草胺半抗原與載體蛋白偶聯，得到甲草胺半抗原-載體蛋白偶聯物；

3)用甲草胺半抗原-載體蛋白偶聯物免疫小鼠，將小鼠脾細胞和骨髓瘤細胞通過融合、篩選，得到甲草胺單克隆雜交瘤細胞株；