[發明專利]用于提高CHO細胞的表達效率的CRISPR-Cas13d系統以及重組CHO細胞

有效

• 申請號: 202011266396.6
• 申請日: 2020-11-13
• 公開（公告）號: CN112342216B
• 公開（公告）日: 2021-07-23
• 發明（設計）人: 丁麗華;葉棋濃;劉婕;張亞楠
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N9/22;C12N15/867;C12N7/01;C12N5/10;C12P21/00;C12R1/91
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 何葉喧

1.用于抑制AMPK基因表達的物質在促進CHO細胞表達外源蛋白中的應用；

所述抑制AMPK基因表達的物質為基于CRISPR-Cas13d系統對AMPK基因的mRNA進行編輯的物質，即CRISPR-Cas13d系統；

所述CRISPR-Cas13d系統為如下（b1）或（b2）或（b3）或（b4）或（b5）：

（b1）包括特異sgRNA和Cas13d蛋白；所述特異sgRNA，其靶序列結合區如序列表的序列3中第1至21位核苷酸所示；

（b2）包括特異DNA分子和Cas13d基因；所述特異DNA分子，其轉錄得到特異sgRNA；所述特異sgRNA，其靶序列結合區如序列表的序列3中第1至21位核苷酸所示；

（b3）包括具有特異DNA分子的質粒和具有Cas13d基因的質粒；所述特異DNA分子，其轉錄得到特異sgRNA；所述特異sgRNA，其靶序列結合區如序列表的序列3中第1至21位核苷酸所示；

（b4）包括特異重組質粒；所述特異重組質粒，其表達所述sgRNA和Cas13d蛋白；所述特異sgRNA，其靶序列結合區如序列表的序列3中第1至21位核苷酸所示；

（b5）包括特異重組慢病毒；所述特異重組慢病毒為表達所述特異sgRNA和Cas13d蛋白的重組慢病毒；所述特異sgRNA，其靶序列結合區如序列表的序列3中第1至21位核苷酸所示。

2.一種促進CHO細胞表達外源蛋白的方法，包括如下步驟：在CHO細胞中導入抑制AMPK基因表達的物質；

所述抑制AMPK基因表達的物質為基于CRISPR-Cas13d系統對AMPK基因的mRNA進行編輯的物質，即CRISPR-Cas13d系統；

所述CRISPR-Cas13d系統為如下（b1）或（b2）或（b3）或（b4）或（b5）：

（b1）包括特異sgRNA和Cas13d蛋白；所述特異sgRNA，其靶序列結合區如序列表的序列3中第1至21位核苷酸所示；

（b2）包括特異DNA分子和Cas13d基因；所述特異DNA分子，其轉錄得到特異sgRNA；所述特異sgRNA，其靶序列結合區如序列表的序列3中第1至21位核苷酸所示；

（b3）包括具有特異DNA分子的質粒和具有Cas13d基因的質粒；所述特異DNA分子，其轉錄得到特異sgRNA；所述特異sgRNA，其靶序列結合區如序列表的序列3中第1至21位核苷酸所示；

（b4）包括特異重組質粒；所述特異重組質粒，其表達所述sgRNA和Cas13d蛋白；所述特異sgRNA，其靶序列結合區如序列表的序列3中第1至21位核苷酸所示；

（b5）包括特異重組慢病毒；所述特異重組慢病毒為表達所述特異sgRNA和Cas13d蛋白的重組慢病毒；所述特異sgRNA，其靶序列結合區如序列表的序列3中第1至21位核苷酸所示。

3.重組CHO細胞在表達外源蛋白中的應用；

所述重組CHO細胞為將特異重組慢病毒導入CHO細胞得到的重組CHO細胞；

所述特異重組慢病毒為表達特異sgRNA和Cas13d蛋白的重組慢病毒；

所述特異sgRNA，其靶序列結合區如序列表的序列3中第1至21位核苷酸所示。