[發明專利]一種活細胞內檢測CLK3激酶活性的生物探針及其應用

有效

• 申請號: 202011261815.7
• 申請日: 2020-11-12
• 公開（公告）號: CN112444509B
• 公開（公告）日: 2022-04-19
• 發明（設計）人: 劉丹;曹旭;陳豐
• 申請（專利權）人: 中國科學技術大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司 11021
• 代理人: 張瑩

1.一種活細胞內檢測CLK3激酶活性的FRET生物探針，其特征在于，所述生物探針包括一對能發生熒光共振能量轉移的熒光供體mTFP和熒光受體EYFP、能識別磷酸化標記的FHA2結構域、氨基酸序列為GGSGG的柔軟構象的連接子以及能被CLK3激酶磷酸化的多肽底物片段，所述能被CLK3激酶磷酸化的多肽底物片段的氨基酸序列為RSRSRSWTRSRSRSR。

2.根據權利要求1所述的活細胞內檢測CLK3激酶活性的FRET生物探針，其特征在于，所述生物探針的DNA序列為SEQ ID NO:1。

3.根據權利要求1所述的活細胞內檢測CLK3激酶活性的FRET生物探針，其特征在于，所述生物探針的氨基酸序列為SEQ ID NO:2。

4.根據權利要求1所述的活細胞內檢測CLK3激酶活性的FRET生物探針，其特征在于，所述生物探針的5’端包括核輸入序列NLS。

5.根據權利要求1所述的活細胞內檢測CLK3激酶活性的FRET生物探針，其特征在于，所述生物探針的5’端包括SRSF2蛋白全長序列。

6.一種表達載體，其包含根據前述權利要求1-5中任一項所述的活細胞內檢測CLK3激酶活性的FRET生物探針。

7.一種細胞，其包含根據權利要求6所述的表達載體。

8.根據權利要求7所述的細胞，其特征在于，所述細胞選自由HeLa細胞、293T細胞、U2OS細胞、A549細胞、MDA-MB-231細胞、MCF7細胞組成的組中。

9.根據前述權利要求1-5中任一項所述的活細胞內檢測CLK3激酶活性的FRET生物探針在CLK3抑制劑分子的篩選中的用途，所述用途是非治療和/或診斷目的的。

10.根據前述權利要求1-5中任一項所述的活細胞內檢測CLK3激酶活性的FRET生物探針在活細胞內檢測CLK3激酶活性中的用途，所述用途是非治療和/或診斷目的的。

11.根據前述權利要求1-5中任一項所述的活細胞內檢測CLK3激酶活性的FRET生物探針在活細胞內檢測CLK3激酶活性的試劑或試劑盒的制備中的用途，所述用途是非治療和/或診斷目的的。