[發明專利]一種快速鑒別轉基因番木瓜的引物組、應用、試劑盒及其方法有效
| 申請號： | 202011261111.X | 申請日： | 2020-11-12 |
| 公開（公告）號： | CN112210622B | 公開（公告）日： | 2021-09-10 |
| 發明（設計）人： | 甘衛堂;鄭劍;陳仕淼;陳燕;石蘭蓉;龐新華;張繼;何江 | 申請（專利權）人： | 廣西壯族自治區亞熱帶作物研究所（廣西亞熱帶農產品加工研究所） |
| 主分類號： | C12Q1/6895 | 分類號： | C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 深圳市科吉華烽知識產權事務所(普通合伙) 44248 | 代理人： | 胡吉科 |
| 地址： | 530002 廣西壯*** | 國省代碼： | 廣西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 快速 鑒別 轉基因 番木瓜 引物 應用 試劑盒 及其 方法 | ||
1.一種快速鑒別轉基因番木瓜的方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)取1-2mm2番木瓜嫩葉于200μL離心管中，加入20μL裂解液，破碎；所述裂解液為0.1—0.25M的NaOH；
(2)瞬時離心，98℃水浴或者PCR儀98℃處理5分鐘，獲得PCR模板；
(3)將PCR模板加入到試劑盒中，95℃2min，然后95℃30s，58℃30s，72℃30s,30個循環，終延伸72℃4min；
所述試劑盒包括PCR反應液、DNA模板和ddH2O成分，所述PCR反應液含有10μmol/L上、下游特異性引物混合物和Taq PCR Mix(2X)，所述上、下游特異性引物混合物為引物對ZJP001和ZJP002、引物對ZJP_CaMV35SP-1和ZJP_CaMV35SP-2，其分別具有如SEQ ID No.1至SEQ IDNo.4所示的序列；所述PCR反應液每管12.0μL，包含ZJP001 0.5μL、ZJP002 0.5μL、ZJP_CaMV35SP-1 0.5μL、ZJP_CaMV35SP-2 0.5μL、Taq PCR Mix(2X)10μL，所述DNA模板0.5μL、ddH2O 7.5μL。
2.根據權利要求1所述的一種快速鑒別轉基因番木瓜的方法，其特征在于，在步驟(2)中，所述離心的條件為5000rpm，離心時間為1min。
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