[發(fā)明專利]一種快速鑒別轉(zhuǎn)基因番木瓜的引物組、應(yīng)用、試劑盒及其方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011261111.X
• 申請(qǐng)日: 2020-11-12
• 公開（公告）號(hào): CN112210622B
• 公開（公告）日: 2021-09-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 甘衛(wèi)堂;鄭劍;陳仕淼;陳燕;石蘭蓉;龐新華;張繼;何江
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣西壯族自治區(qū)亞熱帶作物研究所（廣西亞熱帶農(nóng)產(chǎn)品加工研究所）
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 深圳市科吉華烽知識(shí)產(chǎn)權(quán)事務(wù)所(普通合伙) 44248
• 代理人: 胡吉科

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種快速鑒別轉(zhuǎn)基因番木瓜的引物組、應(yīng)用、試劑盒及其方法，本發(fā)明設(shè)計(jì)了包括兩對(duì)特異性引物，分別是引物對(duì)ZJP001和ZJP002、引物對(duì)ZJP_CaMV35SP?1和ZJP_CaMV35SP?2，據(jù)此建立了轉(zhuǎn)基因番木瓜快速鑒別試劑盒并進(jìn)行檢測(cè)。應(yīng)用本發(fā)明可同時(shí)鑒別Papain和CaMV 35S，本方法具有高通量、特異性強(qiáng)、靈敏度高且快速等優(yōu)點(diǎn)，對(duì)Papain和CaMV 35S的檢測(cè)在轉(zhuǎn)基因番木瓜鑒別診斷的研究上具有重大的意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種快速鑒別轉(zhuǎn)基因番木瓜的引物組、應(yīng)用、試劑盒及其方法。

背景技術(shù)

近年來(lái)，隨著生物技術(shù)的發(fā)展，轉(zhuǎn)基因技術(shù)已成為現(xiàn)代農(nóng)業(yè)史上采用最為迅速的生物技術(shù)，是新農(nóng)業(yè)科技革命的強(qiáng)大動(dòng)力，轉(zhuǎn)基因作物迅速商品化，并通過(guò)貿(mào)易進(jìn)入國(guó)際市場(chǎng)。生物技術(shù)的發(fā)展顯著地提高了農(nóng)產(chǎn)品的產(chǎn)量和質(zhì)量，在一定程度上緩解了人口增長(zhǎng)、自然資源匱乏、可耕作土地面積減少和不可預(yù)期的自然災(zāi)害帶來(lái)的影響等。然而，轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物的安全問(wèn)題引起人們極大的關(guān)注。

世界上許多國(guó)家如歐盟、日本、澳大利亞、新加坡等國(guó)家，紛紛以立法或其他形式對(duì)轉(zhuǎn)基因生物及其加工產(chǎn)品進(jìn)行嚴(yán)格的管理，例如：要求進(jìn)口轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品進(jìn)入本國(guó)市場(chǎng)時(shí)，當(dāng)轉(zhuǎn)基因成分含量超過(guò)一定限度時(shí)應(yīng)加貼標(biāo)簽，以供消費(fèi)者選購(gòu)時(shí)參考，歐盟規(guī)定轉(zhuǎn)基因成分高于0.9％適應(yīng)加貼標(biāo)簽，日本規(guī)定轉(zhuǎn)基因成分高于5％時(shí)應(yīng)加貼標(biāo)簽。目前包括我國(guó)在內(nèi)的許多國(guó)家都開展了轉(zhuǎn)基因番木瓜的研究，并且市場(chǎng)上已經(jīng)有轉(zhuǎn)基因番木瓜的流通。然而，目前國(guó)內(nèi)外尚沒有對(duì)轉(zhuǎn)基因番木瓜及其加工產(chǎn)品的定性和定量檢測(cè)的報(bào)道。

在轉(zhuǎn)基因農(nóng)產(chǎn)品檢測(cè)技術(shù)中，目前應(yīng)用最為廣泛的是以DNA為基礎(chǔ)的PCR相關(guān)檢測(cè)技術(shù)，目標(biāo)基因的擴(kuò)增需要內(nèi)標(biāo)基因來(lái)做對(duì)照以避免出現(xiàn)假陰性的結(jié)果。同時(shí)內(nèi)標(biāo)基因的確立也有助于確定外源基因來(lái)源的物種。目前大豆，玉米，大米的內(nèi)標(biāo)基因均已經(jīng)被確定了，但是番木瓜的內(nèi)標(biāo)基因一直沒有被確定出來(lái)。

公開于該背景技術(shù)部分的信息僅僅旨在增加對(duì)本發(fā)明的總體背景的理解，而不應(yīng)當(dāng)被視為承認(rèn)或以任何形式暗示該信息構(gòu)成已為本領(lǐng)域一般技術(shù)人員所公知的現(xiàn)有技術(shù)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在解決上述技術(shù)問(wèn)題，提供一種快速鑒別轉(zhuǎn)基因番木瓜的引物組、應(yīng)用、試劑盒及其方法，本發(fā)明可以完成對(duì)轉(zhuǎn)基因番木瓜的檢測(cè)，且可以同時(shí)完成對(duì)2組基因的檢測(cè)。

本發(fā)明的技術(shù)方案為：一種快速鑒別轉(zhuǎn)基因番木瓜的引物組，包括兩對(duì)特異性引物，分別是引物對(duì)ZJP001和ZJP002、引物對(duì)ZJP_CaMV35SP-1和ZJP_CaMV35SP-2，其分別具有如SEQ ID No.1至SEQ ID No.4所示的序列。

本發(fā)明針對(duì)一種快速鑒別轉(zhuǎn)基因番木瓜的引物組的應(yīng)用，用于鑒別Papain基因和/或CaMV 35S。

本發(fā)明利用上述兩對(duì)特異性引物，提供一種快速鑒別轉(zhuǎn)基因番木瓜的試劑盒，包括PCR反應(yīng)液、DNA模板和ddH₂O成分，所述PCR反應(yīng)液含有10μmol/L上、下游特異性引物混合物和Taq PCR Mix(2X)，所述上、下游特異性引物混合物為引物對(duì)ZJP001和ZJP002、引物對(duì)ZJP_CaMV35SP-1和ZJP_CaMV35SP-2，其分別具有如SEQ ID No.1至SEQ ID No.4所示的序列。

作為優(yōu)選，所述PCR反應(yīng)液每管12.0μL，包含ZJP001 0.5μL、ZJP002 0.5μL、ZJP_CaMV35SP-1 0.5μL、ZJP_CaMV35SP-2 0.5μL、Taq PCR Mix(2X)10μL，所述DNA模板0.5μL、ddH2O 7.5μL。

本發(fā)明利用上述試劑盒進(jìn)行檢測(cè)轉(zhuǎn)基因番木瓜，還提供一種快速鑒別轉(zhuǎn)基因番木瓜的方法，包括以下步驟：

(1)取1-2mm²番木瓜嫩葉于200μL離心管中，加入20μL裂解液，破碎；