[發(fā)明專利]一種檢測(cè)甾體激素類物質(zhì)中肼類物質(zhì)含量的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011259385.5
• 申請(qǐng)日: 2020-11-12
• 公開（公告）號(hào): CN112461956A
• 公開（公告）日: 2021-03-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張躍;王詩盛;李林梅;靳志忠;曾春玲
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 湖南新合新生物醫(yī)藥有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/36;G01N30/74;G01N30/86
• 代理公司: 北京風(fēng)雅頌專利代理有限公司 11403
• 代理人: 曾志鵬

本發(fā)明涉及一種檢測(cè)甾體激素類物質(zhì)中肼類物質(zhì)含量的方法，包括如下步驟，制備供試品溶液，稱取包含有肼類物質(zhì)的甾體激素類物質(zhì)，加入稀釋劑，分散，加入苯甲醛，混合均勻，加入提取劑，攪拌，靜置分層，取上清液，得到供試品溶液，所述稀釋劑為稀鹽酸和乙醇混合液；稀鹽酸的重量濃度為9.5～10.5％；制備肼類物質(zhì)對(duì)照品溶液；色譜條件，以十八烷基硅烷基為固定相，選用流動(dòng)相進(jìn)行等度洗脫，檢測(cè)波長為300?340nm；流動(dòng)相為0.3g/L依地酸鈉溶液?乙腈；測(cè)定肼類物質(zhì)的含量；本發(fā)明選擇性好，準(zhǔn)確度高，靈敏度高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于有機(jī)物質(zhì)含量檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測(cè)甾體激素類物質(zhì)中肼類物質(zhì)含量的方法。

背景技術(shù)

在醋酸阿比特龍生產(chǎn)過程中，在合成中間體Ⅰ(3β-醇-5,16-二烯-17-腙雄甾)的反應(yīng)過程中使用了水合肼，而肼類物質(zhì)屬于具有警示結(jié)構(gòu)的遺傳毒性雜質(zhì)，遺傳毒性雜質(zhì)極低的限度要求，對(duì)工藝和檢測(cè)分析提出了更高的挑戰(zhàn)，也成為藥品進(jìn)入歐美市場(chǎng)的技術(shù)挑戰(zhàn)和潛在壁壘，為嚴(yán)格控制產(chǎn)品質(zhì)量，在醋酸阿比特龍成品中監(jiān)控肼類物質(zhì)的含量，避免不合格的產(chǎn)品流入市場(chǎng)。目前國內(nèi)外沒有公開報(bào)道的醋酸阿比特龍中肼類物質(zhì)含量測(cè)定的分析方法。

現(xiàn)有技術(shù)中，醋酸阿比特龍的監(jiān)控或檢測(cè)，主要有一下幾種方法，化學(xué)滴定法、薄層色譜法、儀器分析方法(包括高效液相色譜法、氣相色譜法、紫外檢測(cè)法)等，具體選用哪種方法，需要對(duì)醋酸阿比特龍的反應(yīng)體系進(jìn)行分析，還有考慮其他多種因素。以高效液相色譜法為例，在使用該方法進(jìn)行肼類物質(zhì)含量測(cè)定過程中，需要根據(jù)醋酸阿比特龍的具體情況選擇色譜條件，而色譜條件的選擇是測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確性的關(guān)鍵因素，需要投入大量的時(shí)間、精力和資金進(jìn)行摸索驗(yàn)證。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種檢測(cè)甾體激素類物質(zhì)中肼類物質(zhì)含量的方法，選擇性好，準(zhǔn)確度高，靈敏度高。

本發(fā)明的內(nèi)容為一種檢測(cè)甾體激素類物質(zhì)中肼類物質(zhì)含量的方法，包括如下步驟，

制備供試品溶液，

稱取包含有肼類物質(zhì)的甾體激素類物質(zhì)，加入稀釋劑，分散，加入苯甲醛，混合均勻，加入提取劑，攪拌，靜置分層，取上清液，得到供試品溶液，所述稀釋劑為稀鹽酸和乙醇混合液；稀鹽酸的重量濃度為9.5～10.5％；

制備肼類物質(zhì)對(duì)照品溶液，

稱取硫酸肼，加稀釋劑，分散，加入苯甲醛，混合均勻，加入提取劑，攪拌，靜置分層，取上清液，得到肼類物質(zhì)對(duì)照品溶液，所述稀釋劑為稀鹽酸和乙醇混合液；

色譜條件，

以十八烷基硅烷基為固定相，選用流動(dòng)相進(jìn)行等度洗脫，檢測(cè)波長為300-340nm；流動(dòng)相為0.3g/L依地酸鈉溶液-乙腈；

測(cè)定含量，

吸取供試品溶液和雜質(zhì)對(duì)照品溶液，注入高效液相色譜儀，測(cè)定肼類物質(zhì)的含量。

甾體激素類物質(zhì)為醋酸阿比特龍，肼類物質(zhì)為水合肼，所述提取劑為正庚烷。

所述稀釋劑中，稀鹽酸和乙醇的重量配比為(45-55):(55-45)。

所述稀釋劑中，稀鹽酸和乙醇的重量配比為50:50。

色譜柱的長度100-250mm，直徑為3-5mm，粒徑為3-5μm。

檢測(cè)波長為305nm。

流動(dòng)相中，0.3g/L依地酸鈉溶液和乙腈的重量比為3:7。

進(jìn)樣量為40ul，流速為1.0ml/min，柱溫為室溫。

本發(fā)明的檢測(cè)方法，可以在最終的醋酸阿比特龍產(chǎn)物中進(jìn)行檢測(cè)，也可以在制備得到醋酸阿比特龍中間體I時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，以評(píng)估產(chǎn)品和制備方法的優(yōu)劣程度。所述醋酸阿比特龍中間體I和醋酸阿比特龍的結(jié)構(gòu)式分別為：