[發明專利]一種肺癌早期檢測的標志物、試劑盒及方法

有效

• 申請號: 202011258891.2
• 申請日: 2020-11-12
• 公開（公告）號: CN112301130B
• 公開（公告）日: 2021-11-30
• 發明（設計）人: 李華;胡延平;郭子文;沈益行
• 申請（專利權）人: 蘇州京脈生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6869;C12N15/113
• 代理公司: 江蘇昆成律師事務所 32281
• 代理人: 劉尚軻

本申請提供一種肺癌早期檢測的標志物、試劑盒及方法，其中所述miRNA標志物主要包括：hsa?miR?15b?3p、hsa?miR?1246、hsa?miR?1285?3p、hsa?miR?181b?5p、hsa?miR?2276?3p、hsa?miR?301a?3p、hsa?miR?31?5p、hsa?miR?3152?3p、hsa?miR?448、hsa?miR?505?3p、和hsa?miR?92a?3p；所述試劑盒用于樣本的測序文庫制備，并且在對二代測序數據進行分析時，利用銜接子RA5的S2隨機標簽序列作為定量化標簽，去除PCR重復序列，可提高檢測的準確性；所述方法為通過數據分析獲得測試樣本中每個miRNA的表達量，基于其中的miRNA標志物的表達量，采用公式S1計算測試樣本罹患早期肺癌的概率，從而判斷該樣本是否罹患早期肺癌。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，更具體地，涉及一種肺癌早期檢測的標志物、試劑盒及方法。

背景技術

肺癌是世界范圍內發病病例和死亡病例數量最多的惡性腫瘤。2016年中國癌癥中心統計顯示，在429萬新發癌癥人群中，肺癌占據了73.3萬，而在280萬的癌癥死亡人群中，肺癌占據了61萬。其中，非小細胞肺癌約占所有肺癌的80％。肺癌早期病癥不明顯，因此約75％的患者在發現患癌時已處于肺癌中晚期，已有局部浸潤和遠端轉移。晚期肺癌的五年生存率非常低，不足5％。但是，早期肺癌患者5年生存率可高達90％以上。因此，對肺癌的早期診斷是肺癌患者獲得良好預后以及減少死亡率的重要方法。

肺癌的早期診斷方法主要包括：胸部影像學、痰脫落細胞學檢測以及支氣管鏡檢查等，而這些方法的檢測效果目前并不理想。其中，胸部影像學檢測方法包括：X胸片、低劑量螺旋CT(LDCT)和PET-CT等。肺癌在早期通常以肺結節的形式出現，盡管影像學檢測提高了肺結節的檢出率，但由于肺結節病因復雜且臨床表現缺乏特異性，使得對其良惡性的鑒別有一定的難度。因此，X胸片檢查的誤漏診率很高，可達50％以上；LDCT和PET-CT對于肺結節的檢測特異性較差，在肺癌早期篩查和診斷中廣泛應用的LDCT技術其檢測假陽性可高達21％以上；并且，這些影像學受測者都需要承受輻射帶來的健康風險。痰脫落細胞學檢測，診斷中央型肺癌的敏感性約為50％，而對于周圍性肺癌則不足20％。支氣管鏡檢查盡管對于中央型肺癌的檢測敏感性較高，但對于周圍型肺癌的檢測效果依然較差，并且這類侵入式檢查難以在人群中大范圍推廣。因此，需要開發敏感性和特異性均比較高且大眾易于接受的肺癌早期篩查技術。

微小RNA(microRNA，miRNA)是一類長度約為19-25個核苷酸的非編碼短RNA。它能夠通過與靶基因mRNA的3'UTR完全或不完全配對，降解靶基因mRNA或抑制其翻譯。過去的研究表明miRNA參與了多種調節途徑，包括發育、病毒防御、造血過程、器官形成、細胞增殖與死亡、等等。近年來，miRNA的豐度變化與腫瘤發生和發展的密切關系已經在科學界形成了共識并成為了目前的研究熱點。大量研究表明，miRNA在不同腫瘤中有特異性的表達，根據一些miRNA的表達狀態可以區分正常與腫瘤組織。此外，也有不少研究證實，血液中的循環miRNA可以作為包括癌癥在內的各種疾病的診斷標志物，例如中山大學研發的基于血清miRNA的肝癌檢測試劑盒。然而，目前關于循環miRNA作為肺癌診斷標志物的研究仍然存在一些不足，例如：(1)很大一部分研究只是挑選了前人報道的在肺癌組織中表達失調的miRNA作為候選指標，而這些miRNA在血清中并不一定是最優的選擇。(2)一些研究使用了microarray進行了miRNA標志物的初步篩選，但與二代測序相比microarray的信噪比較差，因此其篩選出的miRNA標志物并不一定是優選。(3)能夠通過去除PCR重復從而提高血清miRNA定量準確性的隨機標簽序列尚未在此類研究中得以廣泛應用。因此，目前仍然有必要研發具有臨床應用價值的肺癌早期檢測標志物以及相對應的檢測方法和試劑，以用于肺癌高風險人群的腫瘤檢測，便于及早進行臨床干預。

發明內容

本發明的目的在于，提供一種肺癌早期檢測的標志物、試劑盒及方法，其對于早期肺癌而言，具有更強的檢測能力和檢測準確性，并且操作難度較低。