[發明專利]一種抗酸脅迫能力提高的大腸桿菌工程菌及其應用

有效

• 申請號: 202011258755.3
• 申請日: 2020-11-12
• 公開（公告）號: CN112391329B
• 公開（公告）日: 2023-07-25
• 發明（設計）人: 張娟;楊謹華;堵國成;陳堅
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/70;C12N15/54;C12N15/53;C12N15/60;C12P7/56;C12P7/54;C12P7/40;C12R1/19
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 林娟

1.一種提高大腸桿菌抗酸脅迫能力的方法，其特征在于，所述方法為，在大腸桿菌E.?coli?K12?MG1655中過量表達來源于大腸桿菌E.?coli?K12MG1655的天冬氨酸氨基甲酰基轉移酶催化亞基PyrB、二氫乳清酸脫氫酶PyrD或Orotidine-5'-磷酸脫羧酶的PyrF；所述天冬氨酸氨基甲酰基轉移酶催化亞基PyrB的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.12所示，二氫乳清酸脫氫酶PyrD的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.13所示，Orotidine-5'-磷酸脫羧酶的PyrF的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.14所示；并且，將所述過量表達來源于大腸桿菌E.?coli?K12MG1655的天冬氨酸氨基甲酰基轉移酶催化亞基PyrB、二氫乳清酸脫氫酶PyrD或Orotidine-5'-磷酸脫羧酶的PyrF的大腸桿菌工程菌置于衣康酸脅迫、D-乳酸脅迫或琥珀酸脅迫的條件下。

2.如權利要求1所述的一種提高大腸桿菌抗酸脅迫能力的方法，其特征在于，所述過量表達為先將編碼天冬氨酸氨基甲酰基轉移酶催化亞基PyrB的基因、編碼二氫乳清酸脫氫酶PyrD的基因或編碼Orotidine-5'-磷酸脫羧酶PyrF的基因與表達載體連接，構建含有編碼天冬氨酸氨基甲酰基轉移酶催化亞基PyrB的基因、二氫乳清酸脫氫酶PyrD的基因或Orotidine-5'-磷酸脫羧酶PyrF的基因的重組質粒，再將重組質粒導入大腸桿菌中。

3.一種抗酸脅迫能力提高的大腸桿菌工程菌在發酵生產代謝產物中的應用，其特征在于，所述應用為，將大腸桿菌E.?coli?K12?MG1655工程菌在衣康酸脅迫、D-乳酸脅迫或琥珀酸脅迫的條件下，進行發酵生產代謝產物；

所述大腸桿菌工程菌過量表達來源于大腸桿菌E.?coli?K12MG1655的天冬氨酸氨基甲酰基轉移酶催化亞基PyrB、二氫乳清酸脫氫酶PyrD或Orotidine-5'-磷酸脫羧酶的PyrF；所述酸脅迫是衣康酸脅迫、D-乳酸脅迫或琥珀酸脅迫；所述天冬氨酸氨基甲酰基轉移酶催化亞基PyrB的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.12所示，二氫乳清酸脫氫酶PyrD的氨基酸序列如SEQID?NO.13所示，Orotidine-5'-磷酸脫羧酶的PyrF的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.14所示。