[發(fā)明專利]一種具有致瘙癢活性的山藥蛋白提取物及其制備方法和應(yīng)用

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• 申請日: 2020-11-12
• 公開（公告）號: CN112094314A
• 公開（公告）日: 2020-12-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 高興華;孫冬紅;齊瑞群;洪玉曉;王憶寧;王揚(yáng)斌;郭昊;陳洪鐸
• 申請（專利權(quán)）人: 中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院
• 主分類號: C07K1/18
• 分類號: C07K1/18;C07K1/34;C07K1/36;C12N9/50;A61K38/01
• 代理公司: 沈陽亞泰專利商標(biāo)代理有限公司 21107
• 代理人: 馬維駿

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種致癢工具藥物，具體涉及一種從山藥中分離純化的具有致瘙癢活性的蛋白提取物及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明通過水提法，從山藥中提取具有致癢活性的蛋白水溶液，通過實驗篩選洗脫程序，制備得到具有致癢活性的山藥蛋白組份，所述山藥蛋白組份在制備致癢工具藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明經(jīng)實驗證明山藥蛋白提取物具有致瘙癢活性，在瘙癢模型工具藥研究、生物檢測、疾病診斷及治療等方面具有廣泛的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種致癢工具藥物，具體涉及一種從山藥中分離純化的具有致瘙癢活性的蛋白提取物及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

山藥是薯蕷科(Dioscoreaceae)薯蕷屬(Dioscorea L.)植物薯蕷(Dioscoreaoppositathunb)，為多年生纏繞草本。在中國山藥是一種常見的食品，也是中藥方劑中的一味藥材。山藥中的主要成分有淀粉、多糖、蛋白質(zhì)、皂苷、尿囊素、多巴胺、黃酮類化合物等。

在山藥加工過程中，人體皮膚接觸到山藥汁液，接觸部位會出現(xiàn)強(qiáng)烈的瘙癢感。瘙癢是一種引發(fā)搔抓的不愉快的感覺，是一種常見的臨床癥狀，可在皮膚原發(fā)病變?nèi)缙ぱ住裾睢⑹n麻疹、接觸性皮炎、結(jié)節(jié)性癢疹、皮膚干燥癥、淺部真菌感染、銀屑病和特應(yīng)性皮炎等疾病過程中出現(xiàn)，亦可為系統(tǒng)性疾病如糖尿病、膽汁淤積癥、慢性腎病、腫瘤和艾滋病(AIDS)等的伴隨癥狀。瘙癢的程度密切關(guān)系到病人的生活質(zhì)量和身心健康，嚴(yán)重的瘙癢對患者生活和工作造成極大影響，特別是慢性瘙癢，在成年人當(dāng)中發(fā)病率約為17%，對患者造成明顯的身心困擾。

目前，對于山藥中何種成分通過何種機(jī)制引起人體皮膚瘙癢尚未明確。發(fā)明人前期研究發(fā)現(xiàn)，山藥中的致癢成分不穩(wěn)定，pH變化、溫度升高、乙醇等物理化學(xué)條件變化都能使致癢成分失活，但在低溫條件下致癢成分活性不受影響。

發(fā)明內(nèi)容

鑒于現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明的目的是提供一種從山藥中分離純化的具有致瘙癢活性的蛋白提取物及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明通過水提法，從山藥中提取具有致癢活性的蛋白水溶液，通過實驗篩選洗脫程序，制備得到具有致癢活性的山藥蛋白組份，所述山藥蛋白組份在制備致癢工具藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明經(jīng)實驗證明山藥蛋白提取物具有致瘙癢活性，在瘙癢模型工具藥研究、生物檢測、疾病診斷及治療等方面具有廣泛的應(yīng)用前景。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案。

一種具有致瘙癢活性的山藥蛋白提取物的制備方法，具體步驟如下。

1、樣品制備

步驟1、山藥切片，-20℃冷凍12h，解凍后加入純化水混勻，勻漿20min后得到固液混合物，在4℃條件下以11500rpm轉(zhuǎn)速離心25min取上清，即的樣品溶液1。

步驟2、以NaOH調(diào)節(jié)樣品溶液1的pH至8.0，依次按照0.8μm+0.45μm順序進(jìn)行膜過濾得到樣品溶液2。

2、純化過程

步驟3、平衡：將Q-HPR預(yù)裝柱連接到AKTA儀器上，用溶液A（20mM Tris，pH 8.0）設(shè)定流速2ml/min，流經(jīng)Q-HPR預(yù)裝柱，沖洗10個柱體積（10CV指柱體積，下同）。

步驟4、上樣：步驟3中預(yù)裝柱經(jīng)過平衡之后，將樣品溶液2采用3kDa膜進(jìn)行濃縮，濃縮至100ml后上樣，上樣流速設(shè)定為2ml/min，全部上樣，收集完流穿液后，溶液A進(jìn)行清洗預(yù)裝柱。

步驟5、清洗：將步驟4中經(jīng)過樣品吸附的預(yù)裝柱進(jìn)行溶液A平衡，設(shè)定流速為2ml/min，平衡體積為5個柱體積（5CV）；將上樣頭移到溶液B（20mM Tris，1.0M NaCl，pH 8.0）中進(jìn)行性線洗脫。

步驟6、洗脫：設(shè)定流速2ml/min，溶液B上樣洗脫5個柱體積（5CV），收集不同的洗脫峰。