[發(fā)明專利]一種具有致瘙癢活性的山藥蛋白提取物及其制備方法和應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011258101.0
• 申請日: 2020-11-12
• 公開（公告）號: CN112094314A
• 公開（公告）日: 2020-12-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 高興華;孫冬紅;齊瑞群;洪玉曉;王憶寧;王揚斌;郭昊;陳洪鐸
• 申請（專利權(quán)）人: 中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院
• 主分類號: C07K1/18
• 分類號: C07K1/18;C07K1/34;C07K1/36;C12N9/50;A61K38/01
• 代理公司: 沈陽亞泰專利商標代理有限公司 21107
• 代理人: 馬維駿

1.一種山藥蛋白提取物的制備方法，其特征在于，該制備方法具體步驟如下：

1、樣品制備

步驟1、山藥切片，-20℃冷凍12h，解凍后加入純化水混勻，勻漿20min后得到固液混合物，在4℃條件下以11500rpm轉(zhuǎn)速離心25min取上清，即的樣品溶液1；

步驟2、以NaOH調(diào)節(jié)樣品溶液1的pH，依次按照0.8μm+0.45μm順序進行膜過濾得到樣品溶液2；

2、純化過程

步驟3、平衡：將Q-HPR預(yù)裝柱連接到AKTA儀器上，用溶液A設(shè)定流速2ml/min，流經(jīng)Q-HPR預(yù)裝柱，沖洗10個柱體積；

步驟4、上樣：步驟3中預(yù)裝柱經(jīng)過平衡之后，將樣品溶液2采用3kDa膜進行濃縮，濃縮至100ml后上樣，上樣流速設(shè)定為2ml/min，全部上樣，收集完流穿液后，溶液A進行清洗預(yù)裝柱；

步驟5、清洗：將步驟4中經(jīng)過樣品吸附的預(yù)裝柱進行溶液A平衡，設(shè)定流速為2ml/min，平衡體積為5個柱體積；將上樣頭移到溶液B中進行性線洗脫；

步驟6、洗脫：設(shè)定流速2ml/min，溶液B上樣洗脫5個柱體積，收集不同的洗脫峰；

步驟7、樣品溶液1、樣品溶液2及各組洗脫產(chǎn)物冷凍、干燥。

2.如權(quán)利要求1所述的山藥蛋白提取物的制備方法制得的山藥蛋白組份具有致瘙癢活性。

3.如權(quán)利要求1所述的山藥蛋白提取物的制備方法，其特征在于，步驟1中山藥與純化水的用量比為m：v=1：2。

4.如權(quán)利要求1所述的山藥蛋白提取物的制備方法，其特征在于，步驟2中NaOH調(diào)節(jié)樣品溶液1的pH至8.0。

5.如權(quán)利要求1所述的山藥蛋白提取物的制備方法，其特征在于，溶液A為pH 8.0的20mM Tris。

6.如權(quán)利要求1所述的山藥蛋白提取物的制備方法，其特征在于，步驟5中溶液B為pH8.0的20mM Tris+1.0M NaCl。

7.如權(quán)利要求1所述的山藥蛋白提取物的制備方法制得的山藥蛋白組份或與其他藥物聯(lián)用在制備瘙癢模型工具藥物中的應(yīng)用。