[發明專利]一種尿導管表面大腸埃希菌DNA定量檢測用引物組在審
| 申請號： | 202011258091.0 | 申請日： | 2020-11-11 |
| 公開（公告）號： | CN112280833A | 公開（公告）日： | 2021-01-29 |
| 發明（設計）人： | 楊潔;常慶;沈麗娟;侯劍剛;彭曉瓊;錢瑋;王政平 | 申請（專利權）人： | 上海市嘉定區中心醫院(上海健康醫學院附屬嘉定區中心醫院;上海交通大學醫學院附屬仁濟醫院嘉定分院) |
| 主分類號： | C12Q1/6851 | 分類號： | C12Q1/6851;C12Q1/689;C12Q1/10;C12N15/11 |
| 代理公司： | 上海太優知識產權代理事務所(普通合伙) 31352 | 代理人： | 周長興 |
| 地址： | 201800 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
| 權利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 導管 表面 大腸 埃希菌 dna 定量 檢測 引物 | ||
1.一種尿導管表面大腸埃希菌DNA定量檢測用引物組，每個LAMP引物組由外引物對F3/B3、內引物對FIP/BI和環引物對環F/環B組成，F3、B3、FIP、BI、環F、環B具體如下：
2.利用權利要求1所述的引物組檢測尿導管表面大腸埃希菌的方法，包括以下步驟：
1)提取DNA；
2)配制LAMP檢測反應體系，反應體系包括引物F3、B3、FIP、BI、環F、環B；
3)將提取的DNA加入引物組和LAMP檢測反應體系進行LAMP擴增反應，肉眼觀察濁度，或利用實時濁度儀實時監測核酸擴增反應過程，以圖文形式顯示整個反應過程中各個反應的速率和時間。
3.根據權利要求2所述的方法，其中，步驟1提取DNA，是將導尿管表面的擦拭棉簽以分子級無DNA酶無菌水中洗滌兩次，16,000×g離心5分鐘，將沉淀重新懸浮并在分子級無DNA酶無菌水中洗滌兩次，99℃加熱15分鐘，以16,000×g離心5分鐘以沉淀細胞碎片，將上清液用作LAMP測定。
4.根據權利要求2所述的方法，其中，步驟2的LAMP檢測反應體系為：Bst DNA聚合酶4U、dNTPs200μM、甜菜堿0.8M、MgSO42mM、DNA熒光染料、緩沖液、蒸餾水。
5.根據權利要求2所述的方法，其中，步驟3的LAMP擴增反應是將DNA抽提液2ul加入引物組8ul和LAMP檢測反應體系15ul于65度擴增60分鐘。
6.利用權利要求1所述的引物組檢測尿導管表面大腸埃希菌的快速定量檢測試劑盒，所述試劑盒至少包括含有權利要求1所述的引物組或權利要求2所述的LAMP檢測反應體系。
7.根據權利要求6所述的快速定量檢測試劑盒，其中，LAMP檢測反應體系為：Bst DNA聚合酶4U、dNTPs200μM、甜菜堿0.8M、MgSO42mM、DNA熒光染料、緩沖液、蒸餾水。
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息，商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于上海市嘉定區中心醫院(上海健康醫學院附屬嘉定區中心醫院、上海交通大學醫學院附屬仁濟醫院嘉定分院)，未經上海市嘉定區中心醫院(上海健康醫學院附屬嘉定區中心醫院、上海交通大學醫學院附屬仁濟醫院嘉定分院)許可，擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業授權和技術合作，請聯系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/202011258091.0/1.html，轉載請聲明來源鉆瓜專利網。
