[發明專利]一種檢測唾液樣品中米諾環素的藥物濃度的方法

有效

• 申請號: 202011257443.0
• 申請日: 2020-11-12
• 公開（公告）號: CN112461955B
• 公開（公告）日: 2022-06-10
• 發明（設計）人: 李敬來;彭俊;張天宏
• 申請（專利權）人: 國科卓越（北京）醫藥科技研究有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/14
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種檢測唾液樣品中米諾環素的藥物濃度的方法；采用濾紙采集給藥前及給藥后多時間點的動物口腔唾液樣本，減重法測定唾液采樣重量，干燥后放置于?20℃存放待處理；對所述濾紙中加入飽和EDTAK₂溶液和沉淀劑，所述沉淀劑為甲醇：乙腈按照體積比1:1配置，超聲提取10min，渦旋約30s，離心10min取上清液進行LC?MS/MS分析；建立唾液中米諾環素檢測的標準曲線；對所述濾紙中的米諾環素含量進行定量檢測。本發明通過采用濾紙吸附唾液，EDTAK₂溶液消除濾紙的金屬干擾，以達到降低基質效應的目的。本檢測方法驗證結果顯示準確可靠，回收率高，并對給藥后動物唾液樣品中藥物含量進行測定。

技術領域

本發明涉及生物樣品的檢測技術領域，尤其涉及一種檢測唾液樣品中米諾環素的藥物濃度的方法。

背景技術

鹽酸米諾環素也稱二甲胺四環素鹽酸鹽，是一種廣譜抗菌的四環素類抗生素，可用于治療牙周炎。本研究擬建立一種快速、靈敏、易操作的檢測家兔唾液中米諾環素的藥物濃度的方法，以研究藥物唾液中動力學過程，制定給藥時間間隔并指導藥物制劑的開發。

唾液中米諾環素濃度檢測方法開發需要克服的障礙主要有1)唾液樣品難以定量采集；2)米諾環素易與金屬離子絡合，影響定量；3)LC-MS/MS法檢測中米諾環素易受到基質干擾。因此需要一種檢測唾液樣品中米諾環素的藥物濃度的方法。

發明內容

本發明的目的是為了解決動物唾液中米諾環素的藥物濃度檢測的方法中樣品采集和基質中金屬干擾等問題，建立快速、靈敏、易操作的方法，并將驗證后的方法應用于家兔給藥后米諾環素的唾液藥代動力學研究。

為了實現上述目的，本發明采用了如下技術方案：

本發明包括以下步驟：

A用濾紙采集給藥前及給藥后多時間點的服用過受試藥物動物口腔唾液樣本，減重法測定唾液采樣重量，干燥后放置于-20℃存放；

B對所述濾紙中加入飽和EDTAK₂溶液和沉淀劑，所述沉淀劑為甲醇：乙腈按照體積比1:1配置，超聲提取10min，渦旋約30s，離心10min取上清液進行LC-MS/MS分析；

C建立唾液中米諾環素檢測的標準曲線；

D通過所述標準曲線對所述濾紙中的米諾環素含量進行定量檢測，并利用對應的所述唾液樣本的取樣量，計算唾液中藥物含量。

進一步地，所述校準曲線建立的方法包括采用甲醇稀釋成系列濃度的米諾環素標準品工作溶液，在空白唾液濾紙滴加10μL各濃度標準曲線工作液(5，10，50，100，500，1000，5000ng/mL)以及50μL內標工作液，干燥后對所述濾紙中加入飽和EDTAK₂溶液和沉淀劑，所述沉淀劑為甲醇：乙腈按照體積比1:1配置，超聲提取10min，渦旋約30s，離心10min取上清液進行LC-MS/MS分析，獲得的不同唾液濃度的標準曲線樣品用于標準曲線分析，以米諾環素含量為橫坐標，待測物與內標峰面積比之為縱坐標，用加權最小二乘法進行回歸運算，所得直線回歸方程即為標準曲線。

進一步地，所述濾紙為層析濾紙。

進一步地，采集待檢測動物的時間段為0.5、1、2、4、6、8、12、24、48、72、96、120、144、168h。

進一步地，待檢測動物為中型動物或者大型動物。

與現有技術相比，本發明提供了一種定量檢測唾液樣品中米諾環素的藥物濃度的方法，具備以下有益效果：

1、該檢測唾液樣品中米諾環素的藥物濃度的方法：通過采用濾紙吸附唾液，減重法定量采樣重量，解決了唾液準確采樣的難題。以空白唾液建立標準曲線方法學驗證，并對唾液樣品中藥物含量進行測定，用于家兔給藥米諾環素后唾液藥代動力學的研究；