[發明專利]二倍體簇毛麥3V染色體特異KASP標記檢測用引物、檢測方法及應用

有效

• 申請號: 202011257033.6
• 申請日: 2020-11-11
• 公開（公告）號: CN112410451B
• 公開（公告）日: 2023-06-09
• 發明（設計）人: 鄧光兵;龍海;張潔;蔣云;王穎;郭元林
• 申請（專利權）人: 中國科學院成都生物研究所;四川省農業科學院生物技術核技術研究所;中玉金標記（北京）生物技術股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京正華智誠專利代理事務所(普通合伙) 11870
• 代理人: 李林合

1.一種二倍體簇毛麥3V染色體特異KASP標記檢測用引物，其特征在于，所述引物的核苷酸序列如下：

上游引物F1:5’-GAAGGTGACCAAGTTCATGCTGAGCAGGCTGTCGAAGCTA-3’；

上游引物F2:5’-GAAGGTCGGAGTCAACGGATTGAGCAGGCTGTCGAAGCTC-3’；

下游引物R:5’-TGGAGCACGAGGGTGTGA-3’。

2.采用權利要求1所述引物檢測二倍體簇毛麥3V染色體的方法，其特征在于，包括步驟如下：

S1.提取待測植株的DNA；

S2.以待測植株的DNA為模板，利用權利要求1所述引物對其進行PCR擴增反應；

S3.KASP法檢測PCR擴增產物并分析。

3.根據權利要求2所述的二倍體簇毛麥3V染色體檢測方法，其特征在于，PCR擴增反應體系如下：

4.根據權利要求3所述的二倍體簇毛麥3V染色體檢測方法，其特征在于，PCR反應程序如下：

(1)94℃??????保持15分鐘；

(2)94℃??????保持20秒；

(3)57℃??????保持60秒；

重復(2)至(3)10個循環，其中(3)每個循環降低0.6℃；

(4)94℃??????保持20秒；

(5)55℃??????保持60秒；

重復(4)至(5)26個循環。

5.根據權利要求4所述的二倍體簇毛麥3V染色體檢測方法，其特征在于，在26個循環后再進行如下程序：

(6)94℃??????保持20秒；

(7)57℃??????保持60秒；

重復(6)至(7)5個循環。

6.權利要求1所述的二倍體簇毛麥3V染色體特異KASP標記檢測用引物在簇毛麥3V染色體的高通量鑒定與追蹤中的應用。