[發(fā)明專(zhuān)利]一種紫杉醇的純化方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011256738.6
• 申請(qǐng)日: 2020-11-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112521349B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-04-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 林金新;顏武華;鄧良斌;張珊珊;王一玨;杜小倩
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 福建齊衡科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C07D305/14
• 分類(lèi)號(hào): C07D305/14
• 代理公司: 泉州豐碩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 35249
• 代理人: 許黛君

1.一種紫杉醇的純化方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、準(zhǔn)確稱(chēng)取60～80g粒度為60～100目的紅豆杉細(xì)粉，并用溫度為30～40℃的浸提液浸提3～4次，每次浸提時(shí)間為30～40min，然后將每次浸提后所得的浸提液收集并合并，備用；

S2、將步驟S1中合并后的浸提液投入適量的酸性緩沖溶液中，所得記為混合液；用泵將混合液持續(xù)輸送至電極室、沖洗室和進(jìn)樣室；然后啟動(dòng)電泳儀電源；當(dāng)瓊脂糖親和介質(zhì)與混合液達(dá)到平衡后，用泵將pH為6.4的吸附緩沖溶液輸入至進(jìn)樣室；開(kāi)始電泳吸附，電泳吸附過(guò)程持續(xù)50～60min后再電泳淋洗15～20min；當(dāng)電泳淋洗完畢后，關(guān)閉電源，并將吸附緩沖液換成pH為8.5的洗脫緩沖液，打開(kāi)電源進(jìn)行電泳洗脫，收集活性部分經(jīng)濃縮處理后得紫杉醇濃縮物；

S3、將步驟S2中所得的紫杉醇濃縮物用有機(jī)溶劑溶解，待紫杉醇濃縮物充分溶解后，向其中加入改性氧化鋁，混合攪拌均勻后，對(duì)其進(jìn)行干燥處理，制得物料干樣；將之保存，備用；

S4、將步驟S3中所得的物料干樣裝入層析柱內(nèi)，并通過(guò)流動(dòng)相配合低壓進(jìn)行洗脫，收集其中的有效段；并對(duì)收集的有效段進(jìn)行濃縮處理，所得濃縮液保存，備用；其中，所述流動(dòng)相由乙酸乙酯和正己烷混合調(diào)制而成；且乙酸乙酯占流動(dòng)相體積的百分比為40～60％；

S5、向步驟S4中所得的濃縮液中加入由乙酸乙酯和丙酮等質(zhì)量混合而成的有機(jī)萃取劑對(duì)其進(jìn)行萃取處理，然后將萃取相打入濃縮罐濃縮至浸膏；依照上述步驟對(duì)其進(jìn)行二次柱層析分離，將二次層析分離后所得產(chǎn)物用丙酮溶解，然后轉(zhuǎn)入制備型高效液相色譜儀中進(jìn)行分離純化；

S6、將步驟S5中所得的紫杉醇流分減壓濃縮抽干后，邊攪拌邊向其中加入石油醚，待其自然降至室溫后，經(jīng)養(yǎng)晶、過(guò)濾和干燥等工序后得到重結(jié)晶粗品，重復(fù)上述操作2～3次，再向重結(jié)晶粗品中加入丙酮，并于40～50℃的溫度下溶解，然后邊攪拌邊向其中加入與丙酮體積相同的正己烷，室溫下析晶、過(guò)濾和干燥處理，最終得到純化處理后的紫杉醇成品。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種紫杉醇的純化方法，其特征在于：所述步驟S1中的所用浸提液由甲醇與二氯甲烷等體積混合制備而成。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種紫杉醇的純化方法，其特征在于：所述步驟S1中所用乙醇溶液的濃度為60～75%，且其用量為紅豆杉細(xì)粉的6～8倍。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種紫杉醇的純化方法，其特征在于：所述步驟S2中的酸性緩沖液選用0.1mol/L的檸檬酸—檸檬酸鈉緩沖液，且其pH為6.4。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種紫杉醇的純化方法，其特征在于：所述步驟S2中吸附緩沖溶液選用20mM檸檬酸—檸檬酸鈉緩沖液，且其pH4.5，電流強(qiáng)度I=60mA。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種紫杉醇的純化方法，其特征在于：所述步驟S2中洗脫緩沖液選用20mMTris-HCl，電流強(qiáng)度I=40mA。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種紫杉醇的純化方法，其特征在于：所述步驟S3中所用有機(jī)溶劑選用氯仿或丙酮中的任意一種，且其用量為紫杉醇濃縮物的4～6倍。