[發明專利]一種基于內源乳化的雙歧桿菌微膠囊的制備方法

在審

• 申請號: 202011255534.0
• 申請日: 2020-11-11
• 公開（公告）號: CN112273658A
• 公開（公告）日: 2021-01-29
• 發明（設計）人: 王慶衛
• 申請（專利權）人: 鄭州工業應用技術學院
• 主分類號: A23L33/135
• 分類號: A23L33/135;A23L33/125;A23L33/16;A23P10/30;C12N1/04;C12N1/20;C12R1/01
• 代理公司: 鄭州歐凱專利代理事務所(普通合伙) 41166
• 代理人: 王林華

本發明公開了一種基于內源乳化的雙歧桿菌微膠囊的制備方法，包括如下步驟：S1菌種的活化及種子液的制備，S2微膠囊的制備，S3微膠囊二次包衣，通過二次包埋的微膠囊制備，有效提高了凍干菌粉中菌體對酸性環境的耐受性，具有良好的腸溶性，可以在腸中及時釋放出包裹的益生菌。

技術領域

本發明屬于微膠囊制品技術領域，具體涉及一種基于內源乳化的雙歧桿菌微膠囊的制備方法。

背景技術

微膠囊是指一種具有聚合物或無機物壁的微型容器或包裝物。微膠囊造粒技術就是將固體、液體或氣體包埋、封存在一種微型膠囊內成為一種固體微粒產品的技術。

雙歧桿菌是一種重要的腸道有益微生物，益生菌大致可分為類：雙歧桿菌和乳桿菌，其中雙歧桿菌包括長雙歧桿菌，短雙歧桿菌，青春雙歧桿菌等，這類益生菌群的主要作用是：通過保護身體不受病原菌的感染，達到提高有機體免疫力的功效；通過抑制人體腸道內的致病菌的生長繁殖造成的腐敗情況，促進腸道的蠕動，達到防止便秘的功效；同時在預防和治療腹瀉，分解致癌物質等方面也有重要作用，雙歧桿菌作為一種生理性有益菌，對人體健康具有生物屏障、營養作用、抗腫瘤作用、免疫增強作用、改善胃腸道功能、抗衰老等多種重要的生理功能，雙歧桿菌最主要產物主要包括乳酸、乙酸等，可改善機體pH值，促進鐵和維生素D的吸收并提高磷、鐵、鈣的利用率；雙歧桿菌可以通過磷蛋白磷酸酶分解α-酪蛋白，促進蛋白吸收。

益生菌想要對有機體發揮益生作用，不僅要保證攝入到體內的益生菌是有活性的，同時還要使益生菌有足夠的數量在腸道內定植，通過促進腸道內有益菌的生長繁殖、抑制致病菌的活性達到改善人體腸道功能的特性。但是目前的益生菌制劑由于其制備方法的局限性，導致益生菌對人體內膽汁鹽、胃液中酸性環境的耐受性差，通常使得到達腸道內的益生菌的數量少于可以發揮益生作用的益生菌的活菌數。微膠囊技術可以有效解決這一問題，通過選擇合適的壁材將益生菌包裹起來，既能使益生菌順利通過膽鹽、胃酸環境，又因其良好的溶解性可以將益生菌及時在腸道內釋放定植，從而促進益生菌對人體保健作用的發揮。目前混合壁材和涂層壁材對益生菌的包埋可以在一定程度上對菌活力起到保護作用，但均存在不足之處，如粒徑過大、不能定點釋放等。

發明內容

本發明的目的是為了解決背景技術中所提出的問題，而提供一種基于內源乳化的雙歧桿菌微膠囊的制備方法，通過二次包埋的微膠囊制備，有效提高了凍干菌粉中菌體對酸性環境的耐受性，具有良好的腸溶性，可以在腸中及時釋放出包裹的益生菌。

本發明的目的是這樣實現的：

一種基于內源乳化的雙歧桿菌微膠囊的制備方法，包括如下步驟：

S1、菌種的活化及種子液的制備：將低溫保存的雙歧桿菌在37℃恒溫MRS液體培養基中進行傳代培養，經三代培養后的菌液稀釋后接種在MRS固體培養基中培養24-48h，挑單菌落接種至MRS液體培養基活化傳代2-3的種子液離心洗滌后，得到濃縮菌液低溫保存備用；

S2、微膠囊的制備：以海藻酸鈉和碳酸鈣為壁材，雙歧桿菌為囊材，將S1得到的濃縮菌液活化2-3代后收集菌泥，將滅菌后的海藻酸鈉溶液、菌泥和碳酸鈣溶液混合均勻，加入含有吐溫80的大豆油，攪拌乳化后加入含有冰乙酸的大豆油，待凝膠成型的微膠囊都沉降到溶液底部后，吸去油相，用洗滌介質醋酸鹽溶液洗滌微膠囊，直至無油相殘留，最后將離心收集得到的微膠囊在4℃的條件下儲藏；

S3、微膠囊二次包衣：將S2中的單層微膠囊置于殼聚糖溶液中，攪拌靜置后過濾收集得到微膠囊。

優選的，S2中，海藻酸鈉和碳酸鈣質量比為1:1-8，冰醋酸加入量200-1000μL，乳化劑加入量200-1000μL，乳化時間為5-25min，攪拌速度200-1000r/min，水油體積比1:1-7。

優選的，S3中的殼聚糖溶液中的殼聚糖濃度為0.2-1%，殼聚糖溶液中的pH為3.5-6.5。