[發明專利]一種基于內源乳化的雙歧桿菌微膠囊的制備方法

在審

• 申請號: 202011255534.0
• 申請日: 2020-11-11
• 公開（公告）號: CN112273658A
• 公開（公告）日: 2021-01-29
• 發明（設計）人: 王慶衛
• 申請（專利權）人: 鄭州工業應用技術學院
• 主分類號: A23L33/135
• 分類號: A23L33/135;A23L33/125;A23L33/16;A23P10/30;C12N1/04;C12N1/20;C12R1/01
• 代理公司: 鄭州歐凱專利代理事務所(普通合伙) 41166
• 代理人: 王林華

1.一種基于內源乳化的雙歧桿菌微膠囊的制備方法，其特征在于：包括如下步驟：

S1、菌種的活化及種子液的制備：將低溫保存的雙歧桿菌在37℃恒溫MRS液體培養基中進行傳代培養，經三代培養后的菌液稀釋后接種在MRS固體培養基中培養24-48h，挑單菌落接種至MRS液體培養基活化傳代2-3的種子液離心洗滌后，得到濃縮菌液低溫保存備用；

S2、微膠囊的制備：以海藻酸鈉和碳酸鈣為壁材，雙歧桿菌為囊材，將S1得到的濃縮菌液活化2-3代后收集菌泥，將滅菌后的海藻酸鈉溶液、菌泥和碳酸鈣溶液混合均勻，加入含有吐溫80的大豆油，攪拌乳化后加入含有冰乙酸的大豆油，待凝膠成型的微膠囊都沉降到溶液底部后，吸去油相，用洗滌介質醋酸鹽溶液洗滌微膠囊，直至無油相殘留，最后將離心收集得到的微膠囊在4℃的條件下儲藏；

S3、微膠囊二次包衣：將S2中的單層微膠囊置于殼聚糖溶液中，攪拌靜置后過濾收集得到微膠囊。

2.根據權利要求1所述的一種基于內源乳化的雙歧桿菌微膠囊的制備方法，其特征在于：S2中，海藻酸鈉和碳酸鈣質量比為1:1-8，冰醋酸加入量200-1000μL，乳化劑加入量200-1000μL，乳化時間為5-25min，攪拌速度200-1000r/min，水油體積比1:1-7。

3.根據權利要求1所述的一種基于內源乳化的雙歧桿菌微膠囊的制備方法，其特征在于：S3中的殼聚糖溶液中的殼聚糖濃度為0.2-1%，殼聚糖溶液中的pH為3.5-6.5。

4.根據權利要求1所述的一種基于內源乳化的雙歧桿菌微膠囊的制備方法，其特征在于：S1中濃縮菌液中活菌濃度至少為10⁹cfu/mL。

5.根據權利要求1所述的一種基于內源乳化的雙歧桿菌微膠囊的制備方法，其特征在于：所述雙歧桿菌采用兩歧雙歧桿菌F-35。

6.根據權利要求1所述的一種基于內源乳化的雙歧桿菌微膠囊的制備方法，其特征在于：在S3制得的微膠囊中加入保護劑經過預冷后放入真空冷凍干燥劑保存24h。

7.根據權利要求6所述的一種基于內源乳化的雙歧桿菌微膠囊的制備方法，其特征在于：所述保護劑為脫脂乳、海藻糖、甘油和L-半胱氨酸的混合物，菌泥和保護劑比例為1:2.5，其中海藻糖濃度10%，脫脂乳濃度為15%，甘油濃度3%，L-半胱氨酸濃度2%，得到的活菌濃度至少為7.88×10⁹cfu/mL。