[發明專利]一種基于鎖式探針技術生成單鏈環狀DNA的方法及其應用有效
| 申請號： | 202011252396.0 | 申請日： | 2020-11-11 |
| 公開（公告）號： | CN112359083B | 公開（公告）日： | 2023-01-24 |
| 發明（設計）人： | 齊浩;郜艷敏 | 申請（專利權）人： | 天津大學 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10;C12P19/34;C12Q1/6827 |
| 代理公司： | 北京集佳知識產權代理有限公司 11227 | 代理人： | 劉猛 |
| 地址： | 300354 天津*** | 國省代碼： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 基于 探針 技術 生成 鏈環 dna 方法 及其 應用 | ||
【權利要求書】：
1.一種基于鎖式探針技術生成單鏈環狀DNA的方法，其特征在于，針對單鏈靶基因設計鎖式探針以及blocker探針，然后使用DNA連接酶進行連接，連接后加入外切酶去除未連接的鎖式探針，獲得單鏈環狀DNA；
所述blocker探針的核酸序列如SEQ ID No.5所示；所述鎖式探針的核酸序列如SEQ IDNo.1所示；所述靶基因的核酸序列如SEQ ID No.2或3所示。
2.權利要求1所述方法在檢測核酸單位點變異中的應用。
3.一種檢測核酸單位點變異的方法，其特征在于，針對野生型單鏈靶基因設計鎖式探針以及blocker探針，然后對待測樣本以及野生型單鏈靶基因分別進行連接，連接后加入外切酶去除未連接的鎖式探針，獲得待測樣本單鏈環狀DNA擴增產物和野生型靶基因單鏈環狀DNA連接產物；
將待測樣本擴增產物和野生型靶基因連接產物進行電泳或RCA，若待測樣本單鏈環狀DNA產物顯著多于野生型靶基因單鏈環狀DNA擴增產物，則待測樣本靶基因發生單位點變異；
所述blocker探針的核酸序列如SEQ ID No.5所示；所述鎖式探針的核酸序列如SEQ IDNo.1所示；所述野生型單鏈靶基因的核酸序列如SEQ ID No.2所示。
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