[發(fā)明專利]一種使用全懸浮細(xì)胞測定雞新城疫病毒含量的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011248277.8
• 申請日: 2020-11-10
• 公開（公告）號: CN112359142A
• 公開（公告）日: 2021-02-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 丁莉;劉漢平;李成山;左榕琳;邢剛;岳豐雄;潘倩;何洪奎;肖倩;裴倩如;汪強(qiáng)
• 申請（專利權(quán)）人: 成都天邦生物制品有限公司;史記生物技術(shù)(南京)有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12R1/93
• 代理公司: 成都高遠(yuǎn)知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李高峽;張娟

本發(fā)明提供了一種使用全懸浮細(xì)胞測定雞新城疫病毒含量的方法，屬于病毒檢測領(lǐng)域。本發(fā)明的方法主要包括如下步驟：1)將雞新城疫病毒稀釋成不同的稀釋度；2)接種至全懸浮鴨胚視網(wǎng)膜細(xì)胞中培養(yǎng)；3)測定不同稀釋度的HA效價(jià)并計(jì)算病毒滴度；步驟2)所述病毒接種時，需添加胰酶；胰酶終濃度為10?20μg/ml。經(jīng)對比，本發(fā)明的方法可以在相對較短的時間內(nèi)實(shí)現(xiàn)對雞新城疫病毒的檢測，優(yōu)于傳統(tǒng)的雞胚檢測法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于病毒檢測領(lǐng)域,尤其涉及一種使用全懸浮細(xì)胞測定雞新城疫病毒含量的方法。

背景技術(shù)

雞新城疫(ND)也叫亞洲雞瘟或偽雞瘟，是由新城疫病毒(NDV)引起的禽的一種急性、高度接觸性傳染病，是危害我國養(yǎng)禽業(yè)最嚴(yán)重的禽病之一，世界動物衛(wèi)生組織(OIE)將其列為必須報(bào)告的動物疫病，我國將其列為一類動物疫病。

目前，防治雞新城疫的主要措施是疫苗接種，主要分為活疫苗和滅活疫苗兩大類，把控這兩種疫苗的質(zhì)量最主要的就是制苗用抗原液的病毒含量要達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，目前用來檢測雞新城疫毒種的病毒含量方法只有一種雞胚檢測法，由于SPF雞胚需要提前訂購，并且孵化至10日齡才能使用，耗時時間長，且SPF雞胚費(fèi)用較高，故需要尋求更方便簡捷及準(zhǔn)確的方法。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述問題，本發(fā)明提供了一種雞新城疫病毒含量的測定方法。

本發(fā)明的技術(shù)方案具體為：

一種雞新城疫病毒含量的測定方法，它包括如下步驟：

1)將雞新城疫病毒稀釋成不同的稀釋度；

2)接種至全懸浮鴨胚視網(wǎng)膜細(xì)胞中培養(yǎng)；

3)檢測血凝效價(jià)(HA效價(jià))并計(jì)算病毒滴度；

步驟2)所述病毒接種時，需添加胰酶；胰酶終濃度為10-20μg/ml。

進(jìn)一步地，步驟1)所述的稀釋是以10倍濃度梯度進(jìn)行稀釋。

進(jìn)一步地，步驟2)所述胰酶的終濃度是15μg/ml。

進(jìn)一步地，步驟2)所述的培養(yǎng)的溫度是35℃。

進(jìn)一步地，步驟2)接種病毒前需要補(bǔ)加細(xì)胞體積比15％的DMEM培養(yǎng)基。

進(jìn)一步地，步驟2)接種病毒時細(xì)胞密度為(6～8)×10⁶/ml。

進(jìn)一步地，步驟2)是在5％CO₂條件下培養(yǎng)。

進(jìn)一步地，步驟2)所述培養(yǎng)的時間是72-96h。

更進(jìn)一步地，步驟2)所述培養(yǎng)的時間是72h。

本發(fā)明具有如下有益效果：

1)病毒培養(yǎng)時間短：傳統(tǒng)的雞胚檢測法需在接種病毒后培養(yǎng)120h，而本發(fā)明的方法只需培養(yǎng)72h。

2)靈敏度高：本發(fā)明相比雞胚檢測法更靈敏，能避免后者的一些漏檢情況。

顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。

以下通過實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式，對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。

附圖說明

圖1：AGE1懸浮細(xì)胞P3代觀察圖；培養(yǎng)時間為72h，標(biāo)尺(bar)長度為100μm。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1本發(fā)明的病毒含量檢測方法