[發明專利]一種基于表面增強拉曼光譜結合分子衍生化技術的地溝油中辣椒堿快速超靈敏檢測方法

有效

• 申請號: 202011245213.2
• 申請日: 2020-11-10
• 公開（公告）號: CN112540071B
• 公開（公告）日: 2022-08-23
• 發明（設計）人: 孫宗保;李君奎;鄒小波;郭志明;高云龍;牛增
• 申請（專利權）人: 江蘇大學
• 主分類號: G01N21/65
• 分類號: G01N21/65;G01N1/28
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種基于表面增強拉曼光譜結合分子衍生化技術的地溝油中辣椒堿快速超靈敏檢測方法，其特征在于，步驟如下：

(1)準備不同辣椒堿濃度的模擬地溝油樣本；將辣椒堿標品溶于食用油中，得到模擬地溝油；

(2)合成表面增強拉曼基底：通過種子生長法得到金納米棒粗溶液，粗溶液經離心、純水洗滌，聚乙烯吡咯烷酮功能化，離心洗滌后得到固體金納米棒，將固體分散到乙醇中得到金納米棒溶液，備用；

(3)分別提取步驟(1)中不同辣椒堿濃度的模擬地溝油樣本中的辣椒堿，得到含有辣椒堿的上清液；

(4)將步驟(3)提取出來的辣椒堿分別進行重氮偶合反應，得到不同辣椒堿濃度對應的辣椒堿衍生物溶液；

所述的辣椒堿重氮偶合反應的具體過程為：將一定量的對氨基苯硫酚與濃鹽酸溶解于純水中，得到溶液A；所述對氨基苯硫酚、濃鹽酸與溶液A用量關系為(6.25-50)mg：(0.1-0.5)mL：50mL；所述濃鹽酸的濃度為12M；然后配置質量濃度為2％-18％的亞硝酸鈉水溶液為溶液B，配制質量濃度為2％-18％的碳酸鈉水溶液為溶液C；

重氮化反應：取溶液A和溶液B混合，搖晃20～30s后放入冰水混合物中保持60～90s，形成偶氮中間體；然后進行偶合反應：在偶氮中間體中加入溶液C、步驟(3)中的上清液，搖晃20～30s，然后再放入冰水混合物中反應60～90s，得到辣椒堿衍生物溶液；

(5)將步驟(2)中得到金納米棒溶液分別與步驟(4)中得到的辣椒堿衍生物溶液等比例混合，得到混合液；并檢測混合液中辣椒堿衍生物的表面增強拉曼光譜，分析辣椒堿衍生物的SERS特征峰，得到SERS特征峰強度；

(6)利用步驟(5)中得到的辣椒堿衍生物的特征峰強度與步驟(1)中辣椒堿濃度之間的線性關系繪制標準曲線，得到辣椒堿濃度與辣椒堿衍生物特征峰強度之間關系的回歸方程；

(7)通過檢測未知地溝油樣本的SERS特征峰強度，并代入步驟(6)中得到的回歸方程，進一步計算出辣椒堿濃度。

2.根據權利要求1所述的基于表面增強拉曼光譜結合分子衍生化技術的地溝油中辣椒堿快速超靈敏檢測方法，其特征在于，步驟(1)中所述不同辣椒堿的濃度范圍為10^-4-10^-11；具體方法為：將10mg克辣椒堿標品溶于正常食用油中，用100ml容量瓶定容，得到含有100mg/L辣椒堿的模擬地溝油，再將其用玉米油分別稀釋至10^-4、10^-5、10^-6、10^-7、10^-8、10^-9、10^-10、10^-11M濃度。

3.根據權利要求1所述的基于表面增強拉曼光譜結合分子衍生化技術的地溝油中辣椒堿快速超靈敏檢測方法，其特征在于，步驟(2)中所述固體金納米棒與乙醇用量比為20-150mg：0.5ml。

4.根據權利要求1所述的基于表面增強拉曼光譜結合分子衍生化技術的地溝油中辣椒堿快速超靈敏檢測方法，其特征在于，步驟(3)中提取辣椒堿的具體方法為：將模擬地溝油加入溶劑中，模擬地溝油與溶劑的體積比為1:2，溶劑為甲醇、乙醇或乙腈的一種；經渦旋攪拌器渦旋后，在頻率0～60KHz和功率0～210W的超聲條件下30℃恒溫輔助萃取10～20分鐘，經離心后取上清液，即完成辣椒堿的提取。

5.根據權利要求4所述的基于表面增強拉曼光譜結合分子衍生化技術的地溝油中辣椒堿快速超靈敏檢測方法，其特征在于，取1ml模擬地溝油于10ml離心管中，加入2ml甲醇，使用渦旋攪拌器渦旋10分鐘，然后使用頻率20KHz和功率90W超聲設備在恒溫30度條件下輔助萃取20分鐘，最后在10000轉、30度條件下離心10分鐘取上清液。

6.根據權利要求1所述的基于表面增強拉曼光譜結合分子衍生化技術的地溝油中辣椒堿快速超靈敏檢測方法，其特征在于，步驟(4)中所有溶液均在當天配制，并且存放在4攝氏度冰箱中；所述溶液A、溶液B、溶液C和上清液的用量比為1ml：1ml：1ml：2ml。