[發明專利]檢測新冠疫苗注射后體內中和抗體的膠體金免疫層析試紙條及其制備方法

在審

• 申請號: 202011242427.4
• 申請日: 2020-11-09
• 公開（公告）號: CN112485436A
• 公開（公告）日: 2021-03-12
• 發明（設計）人: 陳真誠;申琳;張啟韓;趙飛駿;肖皓霖;操良麗
• 申請（專利權）人: 桂林電子科技大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/569;G01N33/558;G01N33/58
• 代理公司: 桂林市華杰專利商標事務所有限責任公司 45112
• 代理人: 楊雪梅

本發明公開了一種檢測新冠疫苗注射后體內分泌中和抗體的膠體金免疫層析試紙條及其制備方法，試紙條包括PVC底板，所述PVC底板上從左到右依次搭接樣品墊、膠體金墊、硝酸纖維素膜和吸水濾紙；所述膠體金墊上包被有膠體金標記的重組新型冠狀病毒RBD蛋白；所述硝酸纖維素膜上包被有血管緊張素轉化酶2（ACE2）檢測線，以及包被有鼠抗雞IgG抗體作為質控線。本發明膠體金免疫層析試紙條采用競爭法檢測人體內中和抗體，具有較好的敏感性、特異性、重復性和穩定性，對目標化合物的回收率較高，檢驗結果準確可靠。實現了注射新冠疫苗后對人體內的中和抗體快速定性檢測，且靈敏度高，批內、批間差異小，為臨床使用提供了極大便利。

技術領域

本發明涉及一種血液樣本的快速定性檢測試紙條及制備方法，尤其是利用免疫膠體金層析技術測定人體注射新冠疫苗后全血或血清中中和抗體的快速定性檢測試紙條及其制備方法。

背景技術

目前還沒有專門針對COVID-19的特效藥，新冠疫苗便成了預防COVID-19的有效手段。當前，我國新冠疫苗研發工作總體上處于領先地位，每條技術路線都有進入臨床階段的疫苗，其中滅活疫苗和腺病毒載體疫苗，兩種技術路線共4個疫苗進入了三期臨床。隨著后續疫苗的進一步成功，驗證新冠疫苗的有效性便成為一大需求。因此，建立一種檢測時間短、操作簡單、靈敏度高、特異性高以及易于大規模推廣的注射疫苗后人體內中和抗體測定方法，對患者提供早期、準確的實驗室診斷是可行而必要的。

發明內容

為了檢測注射新冠疫苗后人體是否產生相應抗體的需求，本發明提供一種快速定性檢測注射新冠疫苗后人體內中中和抗體的快速膠體金免疫層析試紙條，所述膠體金免疫層析試紙條通過實際樣本中的中和抗體與硝酸纖維素膜上包被的血管緊張素轉化酶2（ACE2）競爭，有效的定性檢測注射新冠疫苗后人體內是否含有中和抗體這一問題。并且所述試紙條具有較好的敏感性、特異性、重復性和穩定性，對目標化合物的回收率較高，能提供更準確可靠的檢驗結果。

實現本發明目的的技術方案是：

第一方面，本發明提供一種檢測新冠疫苗注射后體內分泌中和抗體的膠體金免疫層析試紙條，包括PVC底板，所述PVC底板上從左到右依次搭接樣品墊、膠體金墊、硝酸纖維素膜和吸水濾紙；

所述膠體金墊上包被有膠體金標記的重組新型冠狀病毒RBD蛋白；

所述硝酸纖維素膜上包被有血管緊張素轉化酶2（ACE2）檢測線，以及包被有鼠抗雞IgG抗體作為質控線。

所述膠體金標記的重組新型冠狀病毒RBD蛋白的濃度為500μg/mL-5mg/mL，其在膠體金墊上的包被量為 400uL；

所述血管緊張素轉化酶2（ACE2）的濃度為0.5-2.6mg/ml，包被量為30uL；

所述鼠抗雞IgG抗體的濃度為0.5-3mg/ml，包被量為30uL。

所述膠體金墊上還包括分離劑，所述分離劑為酪蛋白、BSA或PEG6000中的任意一種或至少兩種的組合，優選為濃度10％的PEG6000。

發明人發現在膠體金墊上加入分離劑，使得重組新型冠狀病毒RBD蛋白與膠體金顆粒的結合更加穩定，進一步降低了膠體金免疫層析試紙條的檢測限，不僅如此，相比于BSA和酪蛋白，采用所述PEG6000作為分離劑時，金標物的復溶性和檢測性能會進一步提升。

本發明，所述新冠病毒鼠抗人抗體隱球菌抗體為抗隱球菌莢膜多糖重組新冠抗原的單克隆抗體和/或抗隱球菌莢膜多糖重組新冠病毒抗原的多克隆抗體，優選為重組新冠病毒抗原抗隱球菌莢膜多糖抗原的單克隆抗體。

所述膠體金墊上的膠體金顆粒的粒徑為30-40nm。

所述檢測線的距離為3-5cm，檢測線與質控線的距離為3-5cm，檢測線和質控線相互不受干擾。

所述樣品墊為玻璃纖維膜或聚酯纖維膜；所述膠體金墊為玻璃纖維膜。