[發明專利]檢測新冠疫苗注射后體內中和抗體的膠體金免疫層析試紙條及其制備方法

在審

• 申請號: 202011242427.4
• 申請日: 2020-11-09
• 公開（公告）號: CN112485436A
• 公開（公告）日: 2021-03-12
• 發明（設計）人: 陳真誠;申琳;張啟韓;趙飛駿;肖皓霖;操良麗
• 申請（專利權）人: 桂林電子科技大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/569;G01N33/558;G01N33/58
• 代理公司: 桂林市華杰專利商標事務所有限責任公司 45112
• 代理人: 楊雪梅

1.一種檢測新冠疫苗注射后體內中和抗體的膠體金免疫層析試紙條，包括PVC底板，其特征在于：

所述PVC底板上從左到右依次搭接樣品墊、膠體金墊、硝酸纖維素膜和吸水濾紙；

所述膠體金墊上包被有膠體金標記的重組新型冠狀病毒RBD蛋白；

所述硝酸纖維素膜上包被有血管緊張素轉化酶2檢測線，以及包被有鼠抗雞IgG抗體作為質控線。

2.根據權利要求1所述的膠體金免疫層析試紙條，其特征在于：所述膠體金標記的重組新型冠狀病毒RBD蛋白的濃度為500μg/mL-5mg/mL，其在膠體金墊上的包被量為 400uL；

所述血管緊張素轉化酶2的濃度為0.5-2.6mg/ml，包被量為30uL；

所述鼠抗雞IgG抗體的濃度為0.5-3mg/ml，包被量為30uL。

3.根據權利要求1所述的膠體金免疫層析試紙條，其特征在于：所述膠體金墊上還包括分離劑，所述分離劑為酪蛋白、BSA或PEG6000中的任意一種或至少兩種的組合。

4.根據權利要求3所述的膠體金免疫層析試紙條，其特征在于：所述分離劑為濃度10％的PEG6000。

5.根據權利要求1所述的膠體金免疫層析試紙條，其特征在于：所述膠體金墊上的膠體金顆粒的粒徑為30-40nm。

6.根據權利要求1所述的膠體金免疫層析試紙條，其特征在于：所述檢測線的距離為3-5cm，所述檢測線與質控線的距離為3-5cm，檢測線和質控線相互不受干擾。

7.根據權利要求1所述的膠體金免疫層析試紙條，其特征在于：所述樣品墊為玻璃纖維膜或聚酯纖維膜；所述膠體金墊為玻璃纖維膜。

8.根據權利要求1-7任一項所述的膠體金免疫層析試紙條的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）制備膠體金墊，在膠體金墊上包被膠體金標記的重組新型冠狀病毒RBD蛋白；

（2）制備硝酸纖維素膜，在硝酸纖維素膜上包被有血管緊張素轉化酶2檢測線，以及包被有鼠抗雞IgG抗體作為質控線；

（3）在PVC底板上從左到右依次搭接樣品墊、膠體金墊、硝酸纖維素膜和吸水濾紙，即得。

9.根據權利要求8所述的膠體金免疫層析試紙條的制備方法，其特征在于：所述膠體金墊的制備，包括以下步驟：

（1）器皿洗干凈，采用硝酸鉀將膠體金顆粒的pH值調整至8.5，加入器皿中，再向其中加入終濃度10％的分離劑，再加入重組新型冠狀病毒RBD蛋白至終濃度30μg/ml，攪拌40min，得到膠體金溶液；

（2）向步驟（1）得到的膠體金溶液中加入10％封閉液至終濃度到1％進行封閉15min；

所述封閉液為酪蛋白和/或BSA溶液；

（3）將步驟（2）得到的膠體金溶液使用4℃、12000 rpm進行離心40min，離心后去上清，使用復溶液復溶沉淀，得到重組新型冠狀病毒RBD蛋白標記液；

所述復溶液為吐溫20和BSA兩種的混合；

（4）將步驟（3）得到的重組新型冠狀病毒RBD蛋白標記液使用噴金劃膜儀按0.1μL/mm進行噴涂到膠體金墊上；

（5）將步驟（4）的膠體金墊在37℃烘箱中干燥240min，干燥后加干燥劑密封保存，即得到膠體金墊。

10.一種檢測新冠疫苗注射后體內中和抗體的膠體金免疫層析試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包括權利要求1-7任一項所述的膠體金免疫層析試紙條。