[發(fā)明專利]提高重組大腸桿菌中2’-巖藻糖基乳糖產(chǎn)量的方法

在審

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• 申請日: 2020-11-09
• 公開（公告）號: CN112322565A
• 公開（公告）日: 2021-02-05
• 發(fā)明（設計）人: 劉龍;陳堅;劉振民;堵國成;李江華;呂雪芹;蘇米亞;林璐;房峻
• 申請（專利權）人: 江南大學;光明乳業(yè)股份有限公司
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/70;C12N15/62;C12P19/00;C12R1/19
• 代理公司: 蘇州市中南偉業(yè)知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 32257
• 代理人: 王玉仙

1.一種提高重組大腸桿菌中2'-巖藻糖基乳糖產(chǎn)量的方法，其特征在于，所述方法是在大腸桿菌宿主中異源表達N端融合蛋白標簽的α-1,2-巖藻糖基轉移酶。

2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的大腸桿菌宿主為大腸桿菌MG1655△fliR::futC,△fuck::fkp,△lacI,△wcaJ,△lacZ,△flgA::futC,△flgG::futC。

3.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的蛋白標簽為麥芽糖結合蛋白、硫氧還蛋白A、轉錄終止抗終止因子或類泛素蛋白修飾分子。

4.根據(jù)權利要求3所述的方法，其特征在于，所述的硫氧還蛋白A的氨基酸序列如SEQID NO.2所示，類泛素蛋白修飾分子的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，麥芽糖結合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，轉錄終止抗終止因子的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示。

5.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的蛋白標簽與α-1,2-巖藻糖基轉移酶之間通過Linker進行連接，所述的Linker為(GGGGS)₂。

6.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的α-1,2-巖藻糖基轉移酶來源于幽門螺旋桿菌，α-1,2-巖藻糖基轉移酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

7.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的N端融合蛋白標簽的α-1,2-巖藻糖基轉移酶通過組成型啟動子P_tac進行表達。

8.一種大腸桿菌重組菌，其特征在于，所述的大腸桿菌重組菌是在大腸桿菌宿主中異源表達N端融合蛋白標簽的α-1,2-巖藻糖基轉移酶；所述的大腸桿菌宿主菌為大腸桿菌MG1655△fliR::futC,△fuck::fkp,△lacI,△wcaJ,△lacZ,△flgA::futC,△flgG::futC，所述的蛋白標簽為硫氧還蛋白A，且所述的N端融合蛋白標簽的α-1,2-巖藻糖基轉移酶通過組成型啟動子P_tac進行表達。

9.權利要求8所述的大腸桿菌重組菌在合成2'-巖藻糖基乳糖中的應用。

10.根據(jù)權利要求9所述的應用，其特征在于，所述的應用是將所述大腸桿菌重組菌種子液以0.5-2％的接種量接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中，于30-37℃、200-2 50r/min條件下培養(yǎng)5-10h后，添加L-巖藻糖1-5g/L、乳糖1-5g/L，繼續(xù)發(fā)酵至60-80h，分離發(fā)酵液得到2'-巖藻糖基乳糖。