[發明專利]一種從貝類血液中提取貝類DNA的方法在審
| 申請號： | 202011238577.8 | 申請日： | 2020-11-09 |
| 公開（公告）號： | CN112175944A | 公開（公告）日： | 2021-01-05 |
| 發明（設計）人： | 董志國;任國梁;李德盛;柳佳玲;梁夏菲;夏青;崔振權 | 申請（專利權）人： | 江蘇海洋大學 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京和聯順知識產權代理有限公司 11621 | 代理人： | 白京萍 |
| 地址： | 222000 江*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 貝類 血液 提取 dna 方法 | ||
1.一種從貝類血液中提取貝類DNA的方法，其特征在于：具體步驟如下：
步驟一：采集貝類血液及前處理；在貝類厚閉殼肌處開一小孔，用一次性無菌注射器抽取貝類血液；將采集的血液移至1.5mL離心管，混勻離心后取上清液。
步驟二：DNA提取；
S21：將步驟一中提取的血液放入1.5mL離心管中，加入600μL裂解液和10μL蛋白酶K，取2個15mL離心管，每個分別加入10mL裂解液和10μL蛋白酶K，用槍頭混勻，每個樣品加610混合液，放入55℃消化一夜；
S22：將氯仿和苯酚分別加入2個10mL大離心管里，每個樣品分別加入300μL苯酚和氯仿；
S23：來回顛倒混勻，離心后緊貼液面吸取上清液500μL，加入1mL無水乙醇進行沉淀；
S24：將樣品充分混勻，發現有絮狀物后進行離心；
S25：倒掉廢液，加500μL 70％酒精，來回顛倒混勻，離心后倒掉廢液，開蓋晾干10min，室溫溶解。
2.根據權利要求1所述的一種從貝類血液中提取貝類DNA的方法，其特征在于：所述步驟一中的小孔直徑為0.3-0.4mm。
3.根據權利要求1所述的一種從貝類血液中提取貝類DNA的方法，其特征在于：所述步驟一中離心轉速為800r/min；時間為3min。
4.根據權利要求1所述的一種從貝類血液中提取貝類DNA的方法，其特征在于：所述S23和S24中的離心轉速均為1200r/min；時間為10min。
5.根據權利要求1所述的一種從貝類血液中提取貝類DNA的方法，其特征在于：所述S25中的離心轉速為1200r/min；時間為5min。
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