[發明專利]一種從貝類血液中提取貝類DNA的方法

在審

• 申請號: 202011238577.8
• 申請日: 2020-11-09
• 公開（公告）號: CN112175944A
• 公開（公告）日: 2021-01-05
• 發明（設計）人: 董志國;任國梁;李德盛;柳佳玲;梁夏菲;夏青;崔振權
• 申請（專利權）人: 江蘇海洋大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 北京和聯順知識產權代理有限公司 11621
• 代理人: 白京萍

本發明公開了一種從貝類血液中提取貝類DNA的方法，步驟一：采集貝類血液及前處理；步驟二：DNA提取；本發明主要為解決貝類育種過程中由于養殖條件或其他問題造成的貝類親本死亡從而丟失樣本的問題；傳統方法提取貝類DNA需進行破壞性取樣，使得對同一個貝類只能在其一個生長階段進行取樣，本發明可以對貝類在不同生長階段進行血液樣本的抽取，可以在不同階段提取DNA，在貝類全基因選擇育種等方面具有重要的研究意義和實用價值，本發明的實驗材料更易獲得，且可以多次重復取血；與傳統用動物組織取樣相比減少了磨樣的過程，使得提取DNA的效率大大提升。

技術領域

本發明涉及DNA提取領域，具體為一種從貝類血液中提取貝類DNA的方法。

背景技術

貝類養殖業在供應優質蛋白質、提高漁民收入、改善近海環境等方面發揮了重要的作用。與此同時貝類養殖也面臨著資源衰竭的問題，越來越多的學者通過分子生物學技術獲取貝類DNA并研究其遺傳信息，用分子輔助育種的方法達到改善貝類品質，選育貝類抗逆新品的目的，解決貝類資源枯竭的問題。但是，傳統的取樣方法多集中于傷害性取樣或非傷害性取樣，如直接解剖、用擴口器開殼等，對貝類造成較強的機械損傷甚至致死，不利于貝類后期保種、遺傳育種及貝類資源的保護尤其是對瀕危珍稀貝類。為此一種從貝類血液中提取貝類DNA的方法。

發明內容

本發明的目的是針對現有技術的缺陷，提供一種從貝類血液中提取貝類DNA的方法，以解決上述背景技術提出的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：一種從貝類血液中提取貝類DNA的方法，具體步驟如下：

步驟一：采集貝類血液及前處理；在貝類厚閉殼肌處開一小孔，用一次性無菌注射器抽取貝類血液；將采集的血液移至1.5mL離心管，混勻離心后取上清液。

步驟二：DNA提取；

S21：將步驟一中提取的血液放入1.5mL離心管中，加入600μL裂解液和10μL蛋白酶K，取2個15mL離心管，每個分別加入10mL裂解液和10μL蛋白酶K，用槍頭混勻，每個樣品加610混合液，放入55℃消化一夜；

S22：將氯仿和苯酚分別加入2個10mL大離心管里，每個樣品分別加入300μL苯酚和氯仿；

S23：來回顛倒混勻，離心后緊貼液面吸取上清液500μL，加入1mL無水乙醇進行沉淀；

S24：將樣品充分混勻，發現有絮狀物后進行離心；

S25：倒掉廢液，加500μL 70％酒精，來回顛倒混勻，離心后倒掉廢液，開蓋晾干10min，室溫溶解。

作為本發明的一種優選技術方案，所述步驟一中的小孔直徑為0.3-0.4mm。

作為本發明的一種優選技術方案，所述步驟一中離心轉速為800r/min；時間為3min。

作為本發明的一種優選技術方案，所述S23和S24中的離心轉速均為1200r/min；時間為10min。

作為本發明的一種優選技術方案，所述S25中的離心轉速為1200r/min；時間為5min。

本發明的有益效果是：本發明主要為解決貝類育種過程中由于養殖條件或其他問題造成的貝類親本死亡從而丟失樣本的問題；傳統方法提取貝類DNA需進行破壞性取樣，使得對同一個貝類只能在其一個生長階段進行取樣，本發明可以對貝類在不同生長階段進行血液樣本的抽取，可以在不同階段提取DNA，在貝類全基因選擇育種等方面具有重要的研究意義和實用價值。

本發明與傳統方法相比，實驗材料更易獲得，且可以多次重復取血(取安全抽血量不會影響貝類之后的生長發育)；與傳統用動物組織取樣相比減少了磨樣的過程，使得提取DNA的效率大大提升，可以提升約40％；用血液提取DNA可以保障動物，不需要進行破壞性取樣。