[發(fā)明專利]一種體胚發(fā)生途徑的椰棗組織培養(yǎng)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011237995.5
• 申請(qǐng)日: 2020-11-09
• 公開（公告）號(hào): CN112335546B
• 公開（公告）日: 2022-04-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李東霞;張寧;徐中亮;李志瑛;張大鵬;王永
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院椰子研究所
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 海口翔翔專利事務(wù)有限公司 46001
• 代理人: 莫臻

本發(fā)明屬植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種體胚發(fā)生途徑的椰棗組織培養(yǎng)方法，是取椰棗材料為外植體，經(jīng)愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)、體胚誘導(dǎo)培養(yǎng)、不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)、生根培養(yǎng)得到性狀一致的椰棗種苗。本發(fā)明以椰棗種子合子胚、無菌苗根尖、幼苗莖尖和嫩葉等椰棗材料為外植體，通過體胚發(fā)生途徑培育出完整的組培苗，可以結(jié)合椰棗性別鑒定技術(shù)規(guī)模化生產(chǎn)性狀一致的椰棗種苗，適合工廠化育苗和規(guī)模化栽培，所得椰棗種苗能夠保持原品種的優(yōu)良性狀，遺傳性狀穩(wěn)定，變異小，具有操作簡(jiǎn)單、成本低、繁殖系數(shù)高等特點(diǎn)，同時(shí)為椰棗分子育種等研究奠定基礎(chǔ)，對(duì)椰棗產(chǎn)業(yè)發(fā)展具有重要意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種以椰棗種子合子胚、無菌苗根尖、幼苗莖尖和嫩葉為外植體，經(jīng)過體胚發(fā)生途徑獲得完整再生植株的方法。

背景技術(shù)

椰棗(Phoenix dactylifera L.)是世界熱區(qū)尤其是北非、中東、西亞的重要經(jīng)濟(jì)作物和主要糧食作物，是該地區(qū)人民重要的食品來源和經(jīng)濟(jì)收入來源。椰棗是雌雄異株，常規(guī)情況下可以通過種子和分蘗苗繁殖，但種子繁殖的實(shí)生苗存在品種性狀不一致、雌株雄株不明確等問題，分蘗苗則存在繁殖系數(shù)低、品種性狀退化等問題。

組織培養(yǎng)具有繁殖系數(shù)高、品種性狀一致等優(yōu)勢(shì)，不僅可以滿足種苗規(guī)模化繁育的需求，也可以為遺傳轉(zhuǎn)化、分子育種等研究奠定基礎(chǔ)。目前，國(guó)外主要以椰棗花序作為組織培養(yǎng)的外植體，作為組織培養(yǎng)途徑之一的胚胎發(fā)生途徑能夠彌補(bǔ)利用種子和分蘗方式繁殖種苗所存在的缺點(diǎn)。經(jīng)檢索，尚無以椰棗材料為外植體利用胚胎發(fā)生途徑進(jìn)行種苗繁育的相關(guān)研究報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種體胚發(fā)生途徑的椰棗組織培養(yǎng)方法，以椰棗材料為外植體，通過體胚發(fā)生途徑培育出完整的椰棗組培苗，可以結(jié)合椰棗性別鑒定技術(shù)規(guī)模化生產(chǎn)性狀一致的椰棗種苗，同時(shí)為椰棗分子育種等研究奠定基礎(chǔ)，對(duì)椰棗產(chǎn)業(yè)發(fā)展具有重要意義。

本發(fā)明所采用的技術(shù)方案：

一種體胚發(fā)生途徑的椰棗組織培養(yǎng)方法，其步驟如下：

1、外植體選取

取椰棗材料為外植體，在超凈工作臺(tái)上進(jìn)行切割操作。所述椰棗材料是椰棗種子合子胚、無菌苗根尖、幼苗莖尖或嫩葉。

2、愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)

將切割好的外植體接種于愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得到愈傷組織，培養(yǎng)條件為暗培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度20～30℃，濕度為55％～85％，每15～70天繼代一次，繼代1～5次。所述愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基是以MS、WPM或Y3為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加0.15～150mg/L 2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)、0.15～150mg/L picloram(毒莠定)、0.15～50mg/L NAA(1-萘乙酸)、0.01～10mg/L 6-BA(6-芐基嘌呤)、0.1～100mg/L硫酸腺嘌呤、3～8g/L植物凝膠、3～9g/L活性炭(200目)、20～40g/L蔗糖，滅菌前培養(yǎng)基pH為5.5～6.0。

3、體胚誘導(dǎo)培養(yǎng)

將得到的愈傷組織接種于體胚誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得到成熟體胚，培養(yǎng)條件為暗培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為20～30℃，濕度為55％～85％，每15～45天繼代一次，繼代1～5次。所述體胚誘導(dǎo)培養(yǎng)基是以MS、WPM或Y3為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加0.1～2mg/L 2ip(N6-異戊烯基腺嘌呤)、0.1～5mg/L 6-BA、0.01～5mg/L NAA、5～80mg/L Gln(谷氨酰胺)、10～180mg/L酸水解酪蛋白、3～8g/L植物凝膠、20～40g/L蔗糖，滅菌前培養(yǎng)基pH為5.5～6.0。

4、不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)