[發明專利]一種體胚發生途徑的椰棗組織培養方法

有效

• 申請號: 202011237995.5
• 申請日: 2020-11-09
• 公開（公告）號: CN112335546B
• 公開（公告）日: 2022-04-29
• 發明（設計）人: 李東霞;張寧;徐中亮;李志瑛;張大鵬;王永
• 申請（專利權）人: 中國熱帶農業科學院椰子研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 海口翔翔專利事務有限公司 46001
• 代理人: 莫臻

1.一種體胚發生途徑的椰棗組織培養方法，其特征在于，其步驟如下：

1)、外植體選取

取椰棗材料為外植體，在超凈工作臺上進行切割操作；所述椰棗材料是種子合子胚、無菌苗根尖；

2)、愈傷組織誘導培養

將切割好的外植體接種于愈傷組織誘導培養基中培養，得到愈傷組織；培養條件為暗培養，培養溫度20～30℃，濕度為55％～85％；所述愈傷組織誘導培養基為MS+40～70mg/L2,4-D+10～50mg/L picloram+0.15mg/L NAA+0.02～0.2mg/L 6-BA+1～5mg/L硫酸腺嘌呤+3～8g/L植物凝膠+3～9g/L活性炭+20～40g/L蔗糖，滅菌前培養基pH為5.5～6.0；

3)、體胚誘導培養

將得到的愈傷組織接種于體胚誘導培養基中培養，得到成熟體胚；培養條件為暗培養，培養溫度為20～30℃，濕度為55％～85％；所述體胚誘導培養基為MS+0.2～2mg/L 2ip+0.1～5mg/L 6-BA+0.2～5mg/L NAA+5mg/L Gln+10mg/L酸水解酪蛋白+3～8g/L植物凝膠+20～40g/L蔗糖，滅菌前培養基pH為5.5～6.0；

4)、不定芽誘導培養

將獲得的成熟體胚轉入到不定芽誘導培養基中進行不定芽誘導培養，得到不定芽；培養條件為光培養，光照強度為1000～2100lx，前30天每日光照時間為2～4小時/天，30天后光照時間為8～14小時/天，培養溫度為20～30℃，濕度為55％～85％；所述不定芽誘導培養基為MS+0.05～2mg/L NAA+0.2～10mg/L 6-BA+0.1～1.0mg/L GA₃+3～8g/L植物凝膠+15～30g/L蔗糖，滅菌前培養基pH為5.5～6.0；

5)、生根培養

將獲得的不定芽接種到生根培養基中進行生根培養，得到組培苗；培養條件為光培養，光照強度為1000～2100lx，前30天光照時間為8～14小時/天，30天后光照時間為12～14小時/天，培養溫度為20～30℃，濕度為55％～85％；所述生根培養基為MS+4～7mg/LNAA+0.1～10mg/L DA-6+3～8g/L植物凝膠+20～35g/L蔗糖，滅菌前培養基pH為5.5～6.0；

6)、試管苗培養

待生根后的組培苗長至葉片數為1～3片、根長為1～3cm時轉接到壯苗培養基中進行培養，得到試管苗；培養條件為光培養，光照強度為1500～2100lx，光照時間為12～14小時/天，培養溫度為25～35℃，濕度為55％～85％；所述壯苗培養基為MS+5～10mg/L NAA+0.1～10mg/L DA-6+3～8g/L植物凝膠+20～35g/L蔗糖，滅菌前培養基pH為5.5～6.0；

7)、煉苗

待試管苗長至葉片數為3～5片、根長為3～5cm時移栽到帶有土壤的育苗袋中，在日光溫室或光照培養室中進行煉苗；培養條件為光培養，光照強度為1500～2500lx，光照時間為7～14小時/天，培養溫度為25～35℃，濕度為60％～80％，煉苗30～50天后即可轉移至遮光度為30～50％的室外蔭棚中二次煉苗，煉苗30～90天后即可移栽至田間種植。