[發明專利]一種四價豬鏈球菌病滅活疫苗佐劑、滅活疫苗及制備方法

在審

• 申請號: 202011237186.4
• 申請日: 2020-11-09
• 公開（公告）號: CN112402602A
• 公開（公告）日: 2021-02-26
• 發明（設計）人: 王楠;楊靈芝;耿興良;孫開安;楊平;張帥
• 申請（專利權）人: 山東濱州沃華生物工程有限公司
• 主分類號: A61K39/39
• 分類號: A61K39/39;A61P37/04;A61K39/116;A61K39/09;A61P31/04
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 張貴賓

本發明涉及一種四價豬鏈球菌病滅活疫苗佐劑、滅活疫苗及制備方法，取殼聚糖1～3g和雙鏈聚肌胞0.1～0.3mg，與質量分數為0.8～1％的乙酸鹽溶液混合，充分溶解后用0.45um濾器過濾，將產物除菌后2～8℃保存制得佐劑。還涉及一種四價豬鏈球菌病滅活疫苗的制備方法，將濃縮滅活豬鏈球菌四價抗原用質量分數0.8～1％生理鹽水稀釋至一定比例后與佐劑按照1:1的比例混合并攪拌均勻，保證抗原活菌不低于1.5×10⁹CFU/ml，制備得到四價豬鏈球菌滅活疫苗。本發明制備的佐劑用作豬鏈球菌病四價滅活疫苗的制備，制備的疫苗具有疫苗多價保護普廣、穩定性高、安全性好、使用方便、疫苗保護效果好的特點。

技術領域

本發明涉及生物學領域，特別是獸用生物制品領域技術領域，具體涉及一種四價豬鏈球菌病滅活疫苗佐劑、滅活疫苗及制備方法。

背景技術

豬鏈球菌是一種重要且危害嚴重的人畜共患傳染病病原，最新分型分為 29個血清型，早先認為35個血清型，后經驗證20、22、26、32、33、34并不是豬鏈球菌。當前我國豬群中流行的主要血清型為血清2型、9型、7型和馬獸疫亞種，血清型眾多及不同地區血清型不同，給豬鏈球菌病的防控帶來的很大的難度。

隨著抗生素使用的越來越規范，豬鏈球菌病的防控更多依靠疫苗來預防。當前商售的疫苗主要有兩類：針對馬獸疫亞種的活疫苗，針對血清2型、7 型和馬獸疫亞種的油乳劑疫苗、蜂膠疫苗和鋁膠疫苗。活疫苗使用范圍窄，僅能對馬獸疫亞種起到一定的預防。油乳劑疫苗注射不當會引起注射局部的化膿，并且加入太多抗原時油乳劑疫苗穩定性受到影響，鋁膠疫苗的抗體水平低、持續時間段且保護率不高。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明提供一種四價豬鏈球菌病滅活疫苗佐劑、滅活疫苗及制備方法，佐劑用于四價豬鏈球菌滅活疫苗的生產過程中，替代傳統的油佐劑和鋁膠佐劑，生產的豬鏈球菌病四價滅活疫苗安全性高、可注射性好、保護率高的優勢，可用于哺乳期仔豬的正常免疫接種。

本發明是通過如下技術方案實現的：

提供一種四價豬鏈球菌病滅活疫苗佐劑的制備方法，取殼聚糖1～3g和雙鏈聚肌胞0.1～0.3mg，與質量分數為0.8～1％的乙酸鹽溶液混合，充分溶解后用0.45um濾器過濾，將產物除菌后2～8℃保存制得佐劑。

作為優選，殼聚糖為88.5％脫乙酰度殼聚糖。

進一步的，乙酸鹽為乙酸和氯化鈉，其中：乙酸為0.8～1ml，氯化鈉為 0.8～1g。

一種使用所述的四價豬鏈球菌病滅活疫苗佐劑的制備方法制備的四價豬鏈球菌病滅活疫苗佐劑。

一種使用所述的四價豬鏈球菌病滅活疫苗佐劑制備四價豬鏈球菌滅活疫苗的方法，將濃縮滅活豬鏈球菌四價抗原用質量分數0.8～1％生理鹽水稀釋后與佐劑按照1:1的比例混合并攪拌均勻，保證抗原活菌不低于1.5×10⁹ CFU/ml，制備得到四價豬鏈球菌滅活疫苗。

進一步的，濃縮滅活豬鏈球菌四價抗原的制備，包括以下步驟：

S1、取血清2型LT株、血清7型YZ株、血清9型SQ株、馬獸疫亞種 XS株凍干菌種，在5％成牛血清的TSA平板上復蘇，37℃培養12～16h，接種含5％成牛血清的TSB培養基，37℃，150rpm搖床震蕩培養4～6小時作為發酵種子液；

S2、在10L發酵罐進行發酵，以TSB培養基添加5％成牛血清分別進行 4種血清型菌株的發酵，37℃，100rpm，溶氧控制30～60％，pH控制在7.2±0.1，培養5～8小時，收獲菌液并進行活菌計數；

S3、使用5％甲醛對上述菌液滅活24h，10000rpm離心滅活菌液，濃縮至5×10¹⁰CFU/ml，即為制苗用抗原。