[發明專利]一種四價豬鏈球菌病滅活疫苗佐劑、滅活疫苗及制備方法

在審

• 申請號: 202011237186.4
• 申請日: 2020-11-09
• 公開（公告）號: CN112402602A
• 公開（公告）日: 2021-02-26
• 發明（設計）人: 王楠;楊靈芝;耿興良;孫開安;楊平;張帥
• 申請（專利權）人: 山東濱州沃華生物工程有限公司
• 主分類號: A61K39/39
• 分類號: A61K39/39;A61P37/04;A61K39/116;A61K39/09;A61P31/04
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 張貴賓

1.一種四價豬鏈球菌病滅活疫苗佐劑的制備方法，其特征在于：取殼聚糖1～3g和雙鏈聚肌胞0.1～0.3mg，與質量分數為0.8～1％的乙酸鹽溶液混合，充分溶解后用0.45um濾器過濾，將產物除菌后2～8℃保存制得佐劑。

2.根據權利要求1所述的四價豬鏈球菌病滅活疫苗佐劑的制備方法，其特征在于：殼聚糖為88.5％脫乙酰度殼聚糖。

3.根據權利要求1所述的四價豬鏈球菌病滅活疫苗佐劑的制備方法，其特征在于：乙酸鹽為乙酸和氯化鈉，其中：乙酸為0.8～1ml，氯化鈉為0.8～1g。

4.一種使用權利要求1所述的四價豬鏈球菌病滅活疫苗佐劑的制備方法制備的四價豬鏈球菌病滅活疫苗佐劑。

5.一種使用權利要求4所述的四價豬鏈球菌病滅活疫苗佐劑制備四價豬鏈球菌滅活疫苗的方法，其特征在于：將濃縮滅活豬鏈球菌四價抗原用質量分數0.8～1％生理鹽水稀釋后與佐劑按照1:1的比例混合并攪拌均勻，保證抗原活菌不低于1.5×10⁹CFU/ml，制備得到四價豬鏈球菌滅活疫苗。

6.根據權利要求5所述的制備四價豬鏈球菌滅活疫苗的方法，其特征在于：濃縮滅活豬鏈球菌四價抗原的制備，包括以下步驟：

S1、取血清2型LT株、血清7型YZ株、血清9型SQ株、馬獸疫亞種XS株凍干菌種，在5％成牛血清的TSA平板上復蘇，37℃培養12～16h，接種含5％成牛血清的TSB培養基，37℃，150rpm搖床震蕩培養4～6小時作為發酵種子液；

S2、在10L發酵罐進行發酵，以TSB培養基添加5％成牛血清分別進行4種血清型菌株的發酵，37℃，100rpm，溶氧控制30～60％，pH控制在7.2±0.1，培養5～8小時，收獲菌液并進行活菌計數；

S3、使用5％甲醛對上述菌液滅活24h，10000rpm離心滅活菌液，濃縮至5×10¹⁰CFU/ml，即為制苗用抗原。

7.一種使用權利要求5所述的制備四價豬鏈球菌滅活疫苗的方法制備的四價豬鏈球菌滅活疫苗。